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围食膜(peritrophic membrane,PM)是位于昆虫中肠细胞和肠腔之间的一层半透膜,起着保护中肠上皮细胞,抵抗微生物入侵的作用,是昆虫中肠细胞和肠腔之间的一种防御性屏障。目前,用于害虫生物防治的昆虫病毒主要有杆状病毒科的核型多角体病毒(nucleopolyhedmvirus,NPV)和颗粒体病毒(granulovirus,GV),其中大部分是针对鳞翅目害虫的,但由于杆状病毒杀虫速度慢,杀虫谱窄,而限制了推广使用。荧光增白剂和昆虫病毒增效蛋白能够与围食膜上特异位点结合,破坏围食膜结构,促进病原微生物对害虫的感染。本文从围食膜的角度入手,初步研究了两种增效因子:荧光增白剂FB28和棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白En-Ha对三种鳞翅目害虫核型多角体病毒的增效作用。1.FB28和En-Ha离体处理三种鳞翅目害虫的围食膜,SDS-PAGE分析其围食膜蛋白条带的变化,发现FB28能够解离大部分围食膜蛋白至上清中,并随时间的延长解离的量逐渐变大;En-Ha能够发挥其金属蛋白酶活性,降解围食膜蛋白,在有金属蛋白酶抑制剂EDTA的存在下,围食膜蛋白没有被降解,同空白对照组保持一致。2.FB28和En-Ha活体处理三种鳞翅目害虫的围食膜,观察其形态学变化,发现喂食含5μl 1%FB28的饲料2h后围食膜呈蓝色荧光,开始破裂,重新食入新鲜饲料后,围食膜又逐渐恢复完整;喂食含5μl 9μg/mL En-Ha的饲料后,6-7h后围食膜破裂,重新食入新鲜饲料后,围食膜亦能恢复完整。两种增效因子对围食膜的破坏作用是短暂的、可恢复的。3.FB28和En-Ha活体处理三种鳞翅目害虫的围食膜,SDS-PAGE进一步分析其围食膜蛋白条带的变化,发现随着围食膜的破裂,相应条带的围食膜蛋白消失,重新食入新鲜饲料后,围食膜又逐渐恢复完整,围食膜蛋白也逐渐恢复正常。4.生物测定FB28和En-Ha对HaNPV、PuNPV、SeNPV的增效作用,两种增效因子能够通过破坏围食膜的完整性,显著降低三种NPV的LC50。5.生物测定FB28和En-Ha的对围食膜的短暂影响作用,结果表明,在新鲜饲料上恢复4h后的死亡率明显低于对照组死亡率,进一步说明FB28和En-Ha对围食膜的破坏作用是短暂的、可恢复的。