荧光增白剂和增效蛋白对三种鳞翅目害虫核型多角体病毒的增效作用

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围食膜(peritrophic membrane,PM)是位于昆虫中肠细胞和肠腔之间的一层半透膜,起着保护中肠上皮细胞,抵抗微生物入侵的作用,是昆虫中肠细胞和肠腔之间的一种防御性屏障。目前,用于害虫生物防治的昆虫病毒主要有杆状病毒科的核型多角体病毒(nucleopolyhedmvirus,NPV)和颗粒体病毒(granulovirus,GV),其中大部分是针对鳞翅目害虫的,但由于杆状病毒杀虫速度慢,杀虫谱窄,而限制了推广使用。荧光增白剂和昆虫病毒增效蛋白能够与围食膜上特异位点结合,破坏围食膜结构,促进病原微生物对害虫的感染。本文从围食膜的角度入手,初步研究了两种增效因子:荧光增白剂FB28和棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白En-Ha对三种鳞翅目害虫核型多角体病毒的增效作用。1.FB28和En-Ha离体处理三种鳞翅目害虫的围食膜,SDS-PAGE分析其围食膜蛋白条带的变化,发现FB28能够解离大部分围食膜蛋白至上清中,并随时间的延长解离的量逐渐变大;En-Ha能够发挥其金属蛋白酶活性,降解围食膜蛋白,在有金属蛋白酶抑制剂EDTA的存在下,围食膜蛋白没有被降解,同空白对照组保持一致。2.FB28和En-Ha活体处理三种鳞翅目害虫的围食膜,观察其形态学变化,发现喂食含5μl 1%FB28的饲料2h后围食膜呈蓝色荧光,开始破裂,重新食入新鲜饲料后,围食膜又逐渐恢复完整;喂食含5μl 9μg/mL En-Ha的饲料后,6-7h后围食膜破裂,重新食入新鲜饲料后,围食膜亦能恢复完整。两种增效因子对围食膜的破坏作用是短暂的、可恢复的。3.FB28和En-Ha活体处理三种鳞翅目害虫的围食膜,SDS-PAGE进一步分析其围食膜蛋白条带的变化,发现随着围食膜的破裂,相应条带的围食膜蛋白消失,重新食入新鲜饲料后,围食膜又逐渐恢复完整,围食膜蛋白也逐渐恢复正常。4.生物测定FB28和En-Ha对HaNPV、PuNPV、SeNPV的增效作用,两种增效因子能够通过破坏围食膜的完整性,显著降低三种NPV的LC50。5.生物测定FB28和En-Ha的对围食膜的短暂影响作用,结果表明,在新鲜饲料上恢复4h后的死亡率明显低于对照组死亡率,进一步说明FB28和En-Ha对围食膜的破坏作用是短暂的、可恢复的。
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