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目的:基于两侧大脑半球相互抑制(IHI)理论,探讨光遗传调控经胼胝体连接两侧半球感觉运动皮层的小清蛋白神经元(CC-Parv)GABA环路对缺血再灌注损伤后运动功能的影响,并进一步探讨两侧大脑半球的兴奋/抑制(E/I)平衡与缺血性脑卒中运动功能恢复的关系,为IHI理论在脑卒中临床康复治疗中的应用提供重要的科学依据。方法:(1)参照改良线栓法制备缺血性脑卒中动物模型,造模组在造模前3周立体定位注射光遗传学病毒,应用小动物磁共振T2WI扫描和Zea-Loga评分进行模型检验。(2)造模后第4天,光遗传组采用波长为550 nm,5m W强度,10 ms频率的连续光照射,干预2周,每天1次,每次持续刺激15分钟,假干预组应用473 nm波长光照射进行干预,其他参数同光遗传组。假手术组和模型组置于普通笼中饲养,只给予同等条件抓取,不给予任何治疗。(3)激光共聚焦扫描确定CC-Parv GABA环路病毒投射情况;应用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估各组小鼠的神经功能缺损情况;采用旷场试验、Catwalk步态分析仪测试各组大鼠的运动功能;利用小动物磁共振波谱观察感觉运动皮层神经物质代谢含量变化;Western Blot分析Glu/GABA关键酶及其受体和KCNA蛋白表达;磁共振T2WI检测缺血再灌注后脑梗死体积变化;Tunel染色检测神经细胞凋亡情况。结果:(1)光遗传学病毒投射CC-Parv GABA环路检测。在iM1注射的表达绿色荧光逆示踪跨单突触病毒fPV-CRE投射至cM1区,与cM1区红色荧光的光敏感蛋白共标的即为光遗传学调控的CC-Parv GABA投射,表明光遗传学病毒定位表达于CC-Parv GABA环路。(2)光遗传调控两侧半球间CC-Parv GABA环路对缺血性脑卒中模型大鼠神经功能评分的影响。干预前,除假手术组外各组大鼠的mNSS评分均升高,且各组间差异无统计学意义(P>0.05)。干预后,光遗传组较其模型组和假干预组评分均下降(P<0.05)。(3)光遗传调控两侧半球间CC-Parv GABA环路对缺血性脑卒中模型大鼠运动功能的影响。Cat Walk步态分析结果显示,干预前模型组、光遗传组和假干预组较假手术组右前肢站立时间、步幅、摆动速度、摆动时间以及通过总时间和平均速度等指标上均具有统计学意义差异(P<0.05),而最大接触面积较假手术组无明显差异(P>0.05);干预后光遗传组较模型组和假干预组右前肢站立时间缩短(P<0.01),步幅加大(P<0.01),摆动速度增快(P<0.01),摆动时间减少(P<0.01),整体平均速度提高(P<0.01),通过总时间减少(较模型组P<0.05,较假干预组P<0.01),但是最大接触面积无明显差异(P>0.05)。旷场实验显示干预前模型组、光遗传组和假干预组运动总路程较假手术组均明显下降(P<0.01);干预后2周,光遗传组较模型组和假干预组运动总路程增加(P<0.01)。(4)光遗传调控CC-Parv GABA环路对缺血性脑卒中模型大鼠神经损伤的影响。T2WI分析显示,干预前模型组、光遗传组和假干预组的脑梗死体积无明显差异(P>0.05);干预后,光遗传组较模型组和假干预组梗死体积显著减小(P<0.01);Tunel染色显示,在光遗传干预2周后,光遗传组较模型组和假干预组光密度总和(IOD)减小,差异具有统计学意义(P<0.01),光遗传组、模型组和假干预组均较假手术组升高(P<0.01)。(5)光遗传调控两侧半球间CC-Parv GABA环路对缺血性脑卒中模型大鼠两侧大脑半球神经化学物质代谢的影响。磁共振波谱结果显示在iM1区模型组、光遗传组和假干预组较假手术组在干预前Glu含量降低(P<0.05),GABA含量升高(P<0.01/0.05),模型成功的3组较假手术组24小时NAA含量也显著下降(P<0.01),各组Cho含量变化无明显差异(P>0.05)。在干预后,光遗传组较模型组和假干预组Glu含量升高(P<0.01/0.05),GABA含量下降(P<0.01);光遗传组较模型组NAA含量也上升(P<0.01),与假干预组比较有上升趋势,但无统计学意义;四组Cho含量无显著差异(P>0.05)。cM1区在干预前模型组、光遗传组和假干预组较假手术组Glu含量升高(P<0.05),在干预后光遗传组较模型组和假干预组GABA含量下降(P<0.01)。在干预前,模型组、光遗传组和假干预组较假手术组Glu(iM1/cM1)下降(P<0.05),GABA(iM1/cM1)升高(P<0.05)。在干预后,光遗传组较模型组Glu(iM1/cM1)升高(P<0.05),较假干预组有上升趋势,但无统计学意义;模型组和假干预组较假手术组GABA(iM1/cM1)升高(P<0.01),光遗传组较模型组和假干预组有下降趋势,但无统计学意义。(6)光遗传调控两侧半球间CC-Parv环路对缺血性脑卒中模型大鼠患侧兴奋/抑制相关蛋白表达的影响。免疫印迹分析显示,光遗传组较模型组和假干预组KCNA蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05),较假手术组差异无统计学意义(P>0.05);光遗传组NMDAR和AMPAR含量较模型组和假干预组增加(P<0.05),模型组较假手术组NMDAR和AMPAR含量含量下降(P<0.05或P<0.01),假干预组较假手术组AMPAR含量减少(P<0.01),NMDAR呈下降趋势但与假手术组差异无统计学意义;而光遗传组较模型组和假干预组GAD67含量明显下降(P<0.05),模型组和假干预组较假手术组GAD67含量升高(P<0.05)。结论:光遗传调控两侧半球间CC-Parv GABA神经环路可提升患侧半球运动皮层兴奋性,改善缺血性脑卒中后神经损伤与肢体运动功能,为IHI理论在脑卒中后运动功能康复中的应用提供实验依据。