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目的:采用妊娠虚寒腹痛大鼠和妊娠大鼠,通过不同模型和剂量,研究附子对胚胎的毒效反应、剂量和模型,研究附子不同炮制品水提液对模型大鼠的毒理、药理效应。方法:1.妊娠虚寒腹痛大鼠模型的建立:选用寒凉药物生石膏、知母(3∶4)100%水煎剂从大鼠妊娠第7d连续灌胃9d,2%冰醋酸腹腔注射大鼠3m L/kg,检测大鼠体重、肛温、扭体潜伏期和扭体次数,甲状腺激素、血清性激素和促性腺激素水平,复制妊娠虚寒腹痛中医证候模型。2.附子灌胃妊娠虚寒腹痛大鼠的急性毒性实验:根据预试验确定不同剂量,24h内单次灌胃妊娠虚寒腹痛大鼠1次,测定半数致死量(LD50),并观察毒性反应表现。3.附子对妊娠虚寒腹痛大鼠的毒-效实验:于妊娠大鼠7~20d以盐附子不同剂量0.38、0.75、1.50、1.86、2.00、3.71g/kg灌胃模型大鼠14d。测定大鼠体重、肛温,扭体反应潜伏期、扭体次数。然后解剖大鼠,观察孕鼠脏器变化及胎鼠发育情况;测定外周血中WBC、RBC、HGB、PLT数量;检测血生化指标,性激素和促性腺激素水平,及三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量。计算胎盘和右侧卵巢脏器系数,并检测胎盘MDA、SOD、GSH-Px含量,并对卵巢和胎盘行组织病理学检查。4.附子对正常妊娠大鼠的毒-效实验:于妊娠大鼠7~15d以附子不同剂量0.38、0.75、1.50、1.86、2.00、3.71g/kg灌胃正常妊娠大鼠9d。测定大鼠体重、肛温,扭体反应为潜伏期、扭体次数。观察孕鼠脏器变化及胎鼠发育情况;测定血液学和血生化指标,并采用ELISA测定各组大鼠性激素、促性腺激素水平;剖取胎盘和卵巢称重并计算脏器系数,随后制备胎盘匀浆采用试剂盒测定MDA、SOD、GSH-Px含量,对卵巢和胎盘行组织病理学检查。结果:1.妊娠虚寒腹痛模型的表现:与正常大鼠组相比,模型组大鼠在灌胃第2d开始腹泻,毛耸立,倦怠少动,精神较差,体重、肛温显著降低(P﹤0.05或P﹤0.01),但阴道未见血或其他异常物流出;孕21d经冰醋酸诱导的扭体反应潜伏期明显缩短(P﹤0.05),扭体次数明显增加(P﹤0.01),剖检可见每只孕鼠孕胎鼠数在10~20只之间,其胎鼠发育情况(胚胎数、活胎数、活胎比、畸胎数、吸收胎数、胚胎脏器系数)与正常组比较无明显差异。上述表现符合妊娠虚寒腹痛的症状表现,故认为模型成功。2.附子灌胃妊娠虚寒腹痛大鼠急性毒性实验结果:附子水提液灌胃妊娠虚寒腹痛大鼠的LD50及95%置信区间为7.43(6.82~8.12)g/kg,毒性表现有:轻者闭目少动、反应迟钝、呼吸浅快,重者精神萎靡不振,出现间歇性张口呼吸,口周流涎或口吐白沫,大、小便失禁,随后在2~24h内安静死亡,或逐渐恢复正常。3.附子对妊娠虚寒腹痛大鼠毒-效实验结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠一般状态较差,从造模第5d天起体重明显下降(P﹤0.05),肛温则从第3d即显著降低(P﹤0.01);扭体反应潜伏期明显缩短而扭体次数增加(P﹤0.05或P﹤0.01);剖检见胎鼠发育情况(胚胎数、活胎数、畸胎数、吸收胎数、胚胎脏器系数)与正常组比较无明显差异;血清T3、T4、E2、PROG含量显著降低和T、FSH含量显著升高(P﹤0.05),同时LH也有升高趋;剖取卵巢和胎盘的脏器系数无明显异常,但胎盘组织SOD活性显著升高(P﹤0.05)、GSH-Px活性和MDA含量有升高趋势;胎盘和卵巢HE染色显示:模型组胎盘组织滋养层细胞减少,结构紊乱,血窦扩张充血,伴间质疏松水肿,蜕膜层和迷路层可见灶性炎细胞浸润,卵巢未见组织形态学异常改变;外周血RBC、HGB显著降低而WBC明显升高(P﹤0.05),PLT数量有降低趋势;CHOL、HDL-C含量显著升高(P﹤0.05),但对肝肾功能相关指标无明显影响。与模型大鼠比较,各指标变化如下:附子不同剂量组大鼠的一般状态与模型组相近,其中0.38g/kg组大鼠体重明显高于模型组(P﹤0.05),而3.71g/kg组体重明显低于正常组(P﹤0.05),与模型组相近;给药第3d时0.38g/kg组大鼠肛温明显升高而1.86、3.71g/kg组明显降低(P﹤0.05),至第7d各药物组大鼠肛温与模型组无明显差异,但1.50g/kg及以下剂量组肛温呈升高趋势、1.86g/kg及以上肛温呈降低趋势;附子各剂量组大鼠扭体次数均减少,其中0.38、0.75、1.50g/kg组有显著性差异(P﹤0.05),除3.71g/kg外的各剂量有延长扭体潜伏期的作用趋势。附子各给药组胚胎数、活胎数、活胎比例等数值相近,从数值看以附子0.75g/kg组胚胎数、活胎比例最高,3.71g/kg组的畸胎数和吸收胎数最大;各组胚胎脏器系数和胎盘脏器系数均无明显变化,附子1.50g/kg组右侧卵巢系数低于模型组(P﹤0.05);卵巢、胎盘HE染色的病理组织学检查结果显示:除附子0.38g/kg组胎盘组织形态学异常改变未得到明显改善外,其余各组增加胎盘组织滋养层细胞,使蜕膜层炎细胞浸润程度减轻;其中0.75、1.50、1.86g/kg组随着剂量的增加,胎盘组织形态学异常改变逐渐恢复正常,1.86g/kg组与正常组相比,未出现其他组织病理学的改变;2.00、3.71g/kg组胎盘滋养层恢复正常,但是蜕膜层弥漫性炎细胞浸润程度随着剂量的升高而加剧,但是依旧比模型组有所改善;各组卵巢组织皮质部有多个处于不同发育阶段的卵泡,髓质富含血管,未见其他组织病理学异常改变。附子各组胎盘组织中SOD明显减少,附子0.75、1.50、1.86g/kg组的GSH-Px活性也明显降低(P﹤0.05),且GSH-Px活性低于正常组水平。血清激素方面,附子各剂量组对血清T3、T4无明显影响;附子1.50g/kg组E2明显升高(P﹤0.05),0.38、2.00g/kg组T水平明显降低(P﹤0.05),各组有升高PROG趋势;除附子0.38g/kg组外其余各给药组对PRL含量有升高趋势,对FSH、LH无明显影响,且3.71g/kg组这两个指标的数值与模型组最相近。外周血常规和血生化方面,附子各剂量组有降低WBC和升高RBC、HGB、PLT数量作用趋势,但无统计学意义,且均未达正常组水平;附子各剂量组能明显降低BUN含量,0.75g/kg组的A/G比值和0.38g/kg组DBIL含量均明显降低(P﹤0.05),各给药组Crea、UA、GLU、TP、GLO、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C等均与模型组相近,无明显差异。4.附子对正常妊娠大鼠毒-效试验结果:正常组妊娠大鼠实验期间一般状态正常,体重逐渐增长,至实验结束时剖检胚胎正常。与正常组比较,附子各剂量组大鼠一般状态正常,体重、肛温均无明显差异。剖检妊娠大鼠显示,附子各剂量组胚胎数、活胎数与正常组相近,其中活胎比例以2.00g/kg组最低,该组的吸收胎数量也最多,另畸形胎数以3.71g/kg组最多,但所有给药组的胚胎脏器系数均明显降低(P﹤0.05)。各组的右侧卵巢脏器系数无明显变化,但3.71g/kg组胎盘脏器系数明显升高(P﹤0.05)。病理组织学检查显示:0.38、0.75、1.50g/kg组胎盘组织正常,未见其他组织病理学异常改变;1.86、2.00、3.71g/kg组随着剂量的增加胎盘组织蜕膜层炎细胞浸润程度加剧;附子各组可使胎盘匀浆中SOD、GSH-Px活性和MDA均明显升高,又以0.75、1.50、2.00g/kg组对SOD的升高作用有统计学意义(P﹤0.05)。体内激素方面,附子2.00g/kg明显升高E2水平(P﹤0.05),1.86、2.00、3.71g/kg组明显降低PROG水平(P﹤0.05),其余各组也有降低PROG趋势,各组对T水平呈降低趋势;各组对促性腺激素LH、FSH、PRL水平均呈升高趋势,其中2.00g/kg对LH的作用和0.75g/kg及以上剂量对FSH的升高作用具有统计学意义(P﹤0.05)。血液学和血生化方面,2.00、3.71g/kg两个剂量均可明显升高外周血RBC、HGB、PLT水平,且后者还能明显增加WBC数量(P﹤0.05);附子各剂量组均使Crea、UA含量均增加,其中0.38、0.75g/kg组对UA的增加具有统计学意义(P﹤0.05);各组能增加ALT水平,其中0.75、1.86及其以上剂量组与正常组比较有统计学意义(P﹤0.05);各组可明显升高TP、GLO含量(P﹤0.05),但对A/G比值无明显影响,所有剂量均能增加CHOL水平,且0.38、1.86、2.00、3.71g/kg组显著增加TG含量,0.75、1.86、2.00附子g/kg的HDL-C水平也显著升高(P﹤0.05)。结论:1.本研究采用石膏-知母水煎液灌胃合冰醋酸诱导扭体法在妊娠大鼠上制备大鼠妊娠虚寒腹痛模型,模拟了该证候畏寒、疼痛的症状,且保证了实验期间妊娠的持续,故是可用于中药药理研究的证候模型。2.附子在不同剂量下对妊娠虚寒腹痛大鼠呈毒、效不同作用,其中1.50g/kg及以下剂量呈保护作用,可通过调节体内性激素和甲状腺激素改善孕鼠状态从而改善胎胚质量;1.86g/kg及以上剂量对妊娠虚寒腹痛大鼠有毒性,使激素紊乱,且对孕鼠和胚胎均有毒性。3.附子对正常妊娠大鼠的毒性为1.86g/kg及以上剂量,不仅引起激素水平紊乱,还使胎盘组织形态学异常。4.本研究发现,附子可引起妊娠大鼠血脂代谢紊乱。