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反复自然流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)是指在妊娠前20周连续发生三次及三次以上自然流产的现象,是导致不孕不育高发的重要原因之一,其发病率占不孕不育人群的10%-15%,但由于其病因复杂且致病机理远未阐明,目前,在世界范围内尚无理想的治疗药物或方法。因此,如何预防和治疗RSA,已经成为生殖医学领域关注的热点问题之一。胚胎种植学说认为,胚胎绒毛外滋养层细胞对子宫内膜进行正常的侵袭,是保证子宫螺旋动脉的重塑和妊娠顺利进行的重要基础。一旦绒毛外滋养层细胞的迁徙及侵袭功能出现异常(滋养层细胞侵袭到母体组织不够深入),即临床上提示的胎盘着床过浅,便会造成血管重塑不完全,进而导致胎盘血液灌注出现障碍,从而引发先兆子痫、胎儿生长受限等妊娠相关疾病,更为甚者,便会造成流产或反复流产的发生,由此可见,绒毛外滋养层细胞的侵袭能力与反复流产的发生密切相关。近年来,miRNAs作为一种参与细胞生物学功能调控的新型因子和新型的临床治疗药物而备受关注。大量研究显示,miRNAs在调控胎盘的发育及功能方面起到重要作用,如,miRNAs参与调控胎盘的免疫耐受、侵袭、血管发生等。而且,课题组前期研究发现miR-133a在RSA患者流产绒毛中表达量显著上调。鉴于绒毛外滋养细胞侵袭功能在妊娠建立过程中的重要性,因此,本研究拟在前期研究基础上,深入探讨miR-133a是否可以调控滋养层细胞的侵袭行为以及可能的分子机制,从而为RSA的临床干预提供理论依据并为治疗提供潜在的靶点,具有重要的临床和社会意义。本研究结果主要分为如下三个部分:第一部分:miR-133a对HTR8-SVneo细胞粘附和侵袭功能的影响。根据脂质体转染因素分为三组,即对照组(转染无关序列)、过表达组(转染mimics)、抑制组(转染inhibitor),借助实时荧光定量PCR的方法检测各组细胞化学转染后的miR-133a的表达,并运用MTT方法以检测细胞粘附能力的变化,同时运用Transwell实验观察HTR8-SVneo细胞的侵袭功能的变化。结果显示,与对照组相比,过表达组中,miR-133a的表达水平显著增加(p<0.05),而滋养层细胞的粘附能力(p<0.01)和侵袭能力均显著降低(p<0.01);在抑制组中,miR-133a的表达水平显著降低(p<0.05),而滋养细胞的粘附能力(p<0.01)和侵袭能力则显著增强(p<0.01)。第二部分:miR-133a对HTR8-SVneo侵袭相关分子转录水平的影响。根据脂质体转染因素分为三组,即对照组(转染无关序列)、过表达组(转染mimics)、抑制组(转染inhibitor),通过实时荧光定量PCR检测转染48h后各组细胞中与侵袭相关的分子转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,过表达组中,滋养细胞中HLA-G的mRNA表达量显著降低(p<0.05);在抑制组中,基质金属蛋白酶9的mRNA水平显著升高(p<0.05)。第三部分:miR-133a对HTR8-SVneo细胞凋亡的影响。根据脂质体转染因素分为三组,即对照组(转染无关序列)、过表达组(转染mimics)、抑制组(转染inhibitor),应用凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡。结果显示,与对照组相比,过表达组中,细胞凋亡率显著增加(p<0.05);在抑制组中,凋亡率没有明显的变化,表明过表达miR-133a时滋养层细胞凋亡率显著增加。综上所述,我们的研究表明,miR-133a在调控滋养层细胞的粘附和侵袭功能方面发挥着重要的作用。miR-133a可能通过调控侵袭相关基因HLA-G,MMP-9的表达及细胞的凋亡,从调控滋养层细胞的侵袭能力。