棉铃虫滞育和非滞育蛹免疫差异研究

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自然条件下,昆虫能够依靠自身强大的先天免疫系统抵御外界环境中病原微生物的侵染。昆虫进入滞育后,其生长发育处于停滞状态、代谢速率较低,所面临的环境中病原微生物的侵染风险同样存在。滞育昆虫如何应对这种风险?现有研究表明,免疫系统在滞育昆虫的防御过程中同样具有十分重要的作用。对昆虫滞育个体来说,先天免疫系统依然能够发挥免疫作用。对于具有滞育特性的昆虫,滞育个体的生长发育处于停滞状态,其是否存在与非滞育个体不同的免疫机制,是值得深入研究的问题。棉铃虫Helicoverpa armigera具兼性滞育特性,以蛹滞育在土壤中越冬,被广泛应用于昆虫滞育调控机制的研究。本研究选择3日龄棉铃虫滞育蛹和非滞育蛹为实验材料,分别测定了滞育蛹和非滞育蛹细胞免疫和体液免疫指标,比较了二者在细胞免疫和体液免疫能力上的差异。主要研究结果如下:1血细胞总量和不同种类血细胞百分含量差异在棉铃虫滞育蛹和非滞育蛹血淋巴中,都主要有浆细胞、珠细胞、粒细胞、类绛色细胞以及原血细胞5种血细胞。对不同日龄棉铃虫滞育蛹和非滞育蛹血细胞总数的测定表明,滞育和非滞育蛹血细胞总量表现出了非常明显的差异:非滞育蛹血细胞总量总体上呈递增趋势,滞育蛹血细胞总量则呈明显的递减趋势,相同日龄滞育和非滞育蛹的血细胞总量存在显著性差异。滞育蛹血淋巴中珠细胞的百分含量较非滞育蛹显著增加,而浆细胞和粒细胞的百分含量较非滞育蛹显著下降。2血细胞包囊反应差异将刚果红染色的Sephadex A-25凝胶颗粒10-15粒注射入棉铃虫蛹体腔内,测定其包囊反应能力。研究结果显示,注射后4h测定滞育蛹和非滞育蛹血细胞包囊反应能力无显著差异,注射后8h测定滞育蛹包囊能力较非滞育蛹显著下降。同样,滞育蛹包囊反应能力在注射后12h和注射后24h均显著低于非滞育包囊反应能力。3血细胞吞噬作用差异制备血细胞单分子膜并将其加入到含有浓度为107cfu/ml的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的大肠杆菌的昆虫细胞培养基中培养,然后分别在相差显微镜和荧光显微镜下,对同一视野进行对比观察,计算吞噬细胞的吞噬率以及吞噬指数。研究结果表明,滞育蛹血细胞对大肠杆菌的吞噬作用同非滞育蛹之间无显著性差异。4酚氧化酶活性差异测定了棉铃虫滞育和非滞育蛹血清中酚氧化酶总活性、血清中游离的酚氧化酶活性、血清中酚氧化酶酶原的激活活性以及血细胞中酚氧化酶活性。研究结果显示,滞育蛹血清中酚氧化酶总活性和非滞育蛹之间没有显著性差异,其中酚氧化酶酶原的激活活性滞育蛹高于非滞育蛹,但是没有达到显著性水平,酚氧化酶活性滞育蛹显著低于非滞育蛹;而滞育蛹血细胞中酚氧化酶活性显著高于非滞育蛹。5诱导抗菌物质抑菌活性差异研究通过用大肠杆菌和藤黄八叠球菌分别对滞育和非滞育蛹进行免疫诱导,并测定免疫血清和诱导抗菌肽抑菌活性。数据表明,棉铃虫滞育蛹和非滞育蛹经大肠杆菌诱导后,滞育蛹免疫血清抑菌活性显著低于非滞育蛹,而诱导抗菌肽抑菌活性和非滞育蛹不存在显著性差异;而藤黄八叠球菌诱导后,滞育蛹和非滞育蛹血清和诱导抗菌肽均未观察到抑菌活性。木研究表明,棉铃虫在滞育后血细胞总量显著下降,参与细胞免疫反应的浆细胞和粒细胞的百分含量显著下降,血细胞对Sephadex A-25包囊能力显著下降,血细胞吞噬作用能力与非滞育蛹没有显著性差异;滞育蛹血清中酚氧化酶总活性与非滞育蛹无显著性差异,血细胞中酚氧化酶活性显著高于非滞育蛹;大肠杆菌诱导后滞育蛹血淋巴抑菌活性显著低于非滞育蛹,诱导抗菌肽抑菌活性与非滞育蛹没有显著差异。这些结果为阐明滞育个体和非滞育个体是否具有不同的免疫机制及滞育昆虫免疫机理提供了基础资料。
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