本文在对仙客来花蕾的外部形态特征、小孢子发育时期的观察之上,着重对仙客来花药培养中的污染问题和影响仙客来花药培养的几个关键因素如基因型、基本培养基、培养基中的激素种类及浓度、碳源及浓度、琼脂浓度、活性炭浓度、低温处理、热激处理及培养条件等问题进行了研究与探讨。结果表明: 1. 小孢子发育时期与花蕾的外部形态之间有一定的对应关系。当花萼包住花瓣、萼长于瓣、花药白绿色时,多数小孢子处于四分体时期或单核早期;当花瓣微露、萼瓣等长或瓣稍长,花药白色时,大多数小孢子处于单核靠边期;当花瓣明显露出花萼、花瓣,瓣长于萼,花药黄色时,大多数小孢子处于双核时期。 2. 仙客来花药适宜的消毒方法是:在无菌条件下,先用 70%酒精浸润 2min,然后用 1%NaCIO 消毒 20min 效果最好,获得无菌材料多,存活率高。 3. 仙客来花药培养中,基因型影响显著。供试的 6 个仙客来基因型中,胚状体的诱导率相差很大,在研究影响仙客来胚状体诱导率的几个关键因素中,如激素、碳源、活性炭、温度处理、接种密度等也都存在着基因型的差异。 4. 仙客来适宜的基本培养基为 B5 培养基。MS 不适于仙客来的花药培养。 5. 通过对不同碳源蔗糖、麦芽糖、白砂糖比较发现,麦芽糖的诱导率最高。蔗糖的诱导率次之。碳源对诱导率的影响极大,当蔗糖浓度为 90g/L 时,仙客来胚状体的诱导率最高。过高或过低的蔗糖浓度均不利于胚状体的诱导。 6. 仙客来的诱导率主要受生长素类激素的影响,并且随着生长素浓度的增加,诱导率大大降低,并且 NAA 运优于 2,4-D;分裂素 6-BA对胚状体的诱导率也有一定影响,当 0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA 配 1<WP=7>仙客来花药培养研究合使用时,在供试的四个基因型中诱导率均最高。 7. 活性炭对仙客来胚状体的诱导率有显著影响。在培养基中加入0.5%的活性炭,能明显提高仙客来胚的诱导率,但当浓度为 1%时,胚产量明显下降。由此可见,活性碳的促进作用与其浓度有关,过量的活性炭对小孢子胚胎发生产生了副作用。 8. 低温预处理是仙客来花药诱导胚状体不可缺少的环节。不经低温预处理,只有普通大红有胚状体的发生,而且仅为 1.8%。可见低温预处理能明显地促进仙客来胚的诱导率,但时间过长或过短,都不利于胚的诱导。4℃条件下处理 5 天,四个基因型的仙客来都具有最高的胚诱导率。 9. 给予 33℃的高温处理 24h 最有利于胚状体的诱导。但温度过高或处理时间过长,均不能促进胚的诱导。 10. 仙客来在不同的接种密度水平上诱导率不同,其基因型反应显著。材料普通大红在三种接种密度上胚状体的诱导率相差不太明显。而材料 F1代的杜鹃紫、彩云、红喉粉冠则随着接种密度的增加,诱导率明显增加。 11. 对培养中小孢子的发育过程,胚状体的发生、发育过程做了细胞学、组织学观察。观察到小孢子早期分裂存在均等分裂。再由两个子细胞共同分裂,最后形成胚状体。