【摘 要】
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黄曲霉毒素B1（AFB1）广泛存在于饲料中,严重影响了人畜安全。由于物理法和化学法脱毒存在诸多限制,生物降解法已成为AFB1脱毒的研究热点。研究表明,利用细菌脱毒剂降解AFB1不仅安全无污染,而且能够提高饲料适口性。本研究内容如下:1.黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选与鉴定以发霉饲料等样品为研究对象,利用香豆素为唯一碳源的培养基进行初筛,采用ELISA试剂盒检测初筛菌株AFB1降解率的方法进行复筛。结
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黄曲霉毒素B1（AFB1）广泛存在于饲料中,严重影响了人畜安全。由于物理法和化学法脱毒存在诸多限制,生物降解法已成为AFB1脱毒的研究热点。研究表明,利用细菌脱毒剂降解AFB1不仅安全无污染,而且能够提高饲料适口性。本研究内容如下:1.黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选与鉴定以发霉饲料等样品为研究对象,利用香豆素为唯一碳源的培养基进行初筛,采用ELISA试剂盒检测初筛菌株AFB1降解率的方法进行复筛。结果表明,初筛在香豆素平板上得到79株生长良好的菌株,复筛分离出6株AFB1降解率在60%以上的菌株,其中菌株ZJ13和ZJ20的AFB1降解率最高,可达68.47%和84.23%。通过形态学、生理生化和16S rRNA分子生物学法鉴定菌株ZJ13为戊糖片球菌,命名为P.pentosaceus ZJ13,菌株ZJ20为枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis ZJ20。2.黄曲霉毒素B1降解菌株的生物学特性研究首先测定P.pentosaceus ZJ13的和B.subtilis ZJ20的生长曲线,P.pentosaceus ZJ13在6～10 h处于对数期,10～18 h处于稳定期。B.subtilis ZJ20在4～8 h进入对数期,8～20 h处于稳定期。对P.pentosaceus ZJ13的和B.subtilis ZJ20酸和胆盐耐受性进行研究,结果表明,在pH3.0、4.0、5.0处理3.0 h后,P.pentosaceus ZJ13的存活率分别为58.77%、64.23%、69.78%,B.subtilis ZJ20的存活率分别为69.11%、74.40%、81.06%。在0.1%、0.2%、0.3%的牛胆盐中培养3.0 h后,P.pentosaceus ZJ13存活率分别为72.36%、56.28%、43.88%,B.subtilis ZJ20存活率分别为91.56%、77.35%、68.12%。此外,研究了菌株在模拟人工胃肠道下的耐受性,结果表明,在人工胃液中作用3.0 h后,P.pentosaceus ZJ13存活率为37.35%,B.subtilis ZJ20存活率为62.39%。在人工肠液中处理8.0 h,P.pentosaceus ZJ13存活率为20.18%,B.subtilis ZJ20存活率为43.85%。抑菌试验表明,两株AFB1降解菌对大肠杆菌CVCC1527（Escherichia coli）、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028（Salmonella enterica subsp）、金黄色葡萄球菌ATCC6538（Staphylococcus aureaus）均有良好抑菌活性。3.黄曲霉毒素B1降解菌株在饲料原料中的的应用通过对麸皮和豆粕的中的天然AFB1进行降解,测定单菌株及组合菌株在饲料原料中的降解效果,来模拟本试验筛选的AFB1降解菌P.pentosaceus ZJ13和B.subtilis ZJ20在实际生产中的应用效果。通过单因素试验确定降解麸皮中天然AFB1的最优发酵参数为:接种量10 mL/100 g,发酵温度37℃,发酵时间48 h。通过不同发酵底物对比试验可知,P.pentosaceus ZJ13和B.subtilis ZJ20对豆粕中AFB1降解率普遍低于对麸皮的降解率。
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