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尿酸氧化酶(UOX)在人体的嘌呤代谢中起到了重要的作用,是嘌呤代谢中一种关键的酶,它可以催化人体中尿酸转化为尿囊素和过氧化氢,尿酸在人体类的溶解度为11mg/100mLH2O,而尿囊素的溶解度约为147mg/100mLH2O,是尿酸溶解度的13.5倍左右,因此将尿酸转化为尿囊素可以促使尿囊素快速的溶解排除体内,从而降低人体内尿酸的含量。人类及灵长类动物在进化中失去了尿酸氧化酶的基因的活性,所以尿酸氧化酶一旦在人体中积累会引起例如痛风,高尿酸症,尿酸盐肾病等的各种病症。所以尿酸氧化酶是一种重要的医学用酶。
尿酸氧化酶作为临床上一种新的治疗痛风的药物,可以迅速催化尿酸的分解从而降低人体内尿酸的含量,且可以降级人体内尿酸晶体的含量,相比于其他治疗方法尿酸氧化酶效果快且无副作用。血清中的尿酸含量是诊断痛风以及高尿酸症的重要标志,尿酸氧化酶同时还能用于人体中尿酸含量的检测,能够迅速的检测出人体内尿酸的浓度,尿酸氧化酶不仅能用于临床治疗,也能用于临床的检测试剂应用。
我们的研究利用PCR技术从马克思克鲁维酵母中克隆尿酸氧化酶基因,构建了重组载体CBM3-INTEIN-UOX,重组质粒转化到了表达宿主菌株EscherichiacoliBL21(DE3)细胞中并通过IPTG诱导菌株,成功表达蛋白。重组菌株利用了纤维素结合模块与内含肽的结合,通过温度与ph值的改变从而断裂内含肽得到纯净的无标签尿酸氧化酶(KmUOX)。本研究对不同条件下内含肽的断裂情况,及蛋白的纯化效率进行了探索。通过纯化条件的摸索,最终发现在40℃9小时条件下的纯化效率可以达到得到77.11%。得到的纯净的尿酸氧化酶通过293mm紫外吸光值的变化测定,最终测出其最高酶活可以达到50.54IU/mg是之前有报道研究的尿酸氧化酶中活性最高的。其Km,Vmax,Kcat分别为67.60μM,56.35μmol/min·mg,和32.74S-1。在后续的性质摸索中发现其最适ph最适温度分别为9.0与42℃。在探索纯化后的尿酸氧化酶的热稳定性时候发现其能在40℃孵育90小时后仍能保持79.75%的活性,其具有一定的热稳定性。我们的研究发现了一种新的尿酸氧化酶,其与其他尿酸氧化酶比较有较高的酶活与一定的热稳定性,这为之后研究或应用尿酸氧化酶提供了一个新的选择。
尿酸氧化酶作为临床上一种新的治疗痛风的药物,可以迅速催化尿酸的分解从而降低人体内尿酸的含量,且可以降级人体内尿酸晶体的含量,相比于其他治疗方法尿酸氧化酶效果快且无副作用。血清中的尿酸含量是诊断痛风以及高尿酸症的重要标志,尿酸氧化酶同时还能用于人体中尿酸含量的检测,能够迅速的检测出人体内尿酸的浓度,尿酸氧化酶不仅能用于临床治疗,也能用于临床的检测试剂应用。
我们的研究利用PCR技术从马克思克鲁维酵母中克隆尿酸氧化酶基因,构建了重组载体CBM3-INTEIN-UOX,重组质粒转化到了表达宿主菌株EscherichiacoliBL21(DE3)细胞中并通过IPTG诱导菌株,成功表达蛋白。重组菌株利用了纤维素结合模块与内含肽的结合,通过温度与ph值的改变从而断裂内含肽得到纯净的无标签尿酸氧化酶(KmUOX)。本研究对不同条件下内含肽的断裂情况,及蛋白的纯化效率进行了探索。通过纯化条件的摸索,最终发现在40℃9小时条件下的纯化效率可以达到得到77.11%。得到的纯净的尿酸氧化酶通过293mm紫外吸光值的变化测定,最终测出其最高酶活可以达到50.54IU/mg是之前有报道研究的尿酸氧化酶中活性最高的。其Km,Vmax,Kcat分别为67.60μM,56.35μmol/min·mg,和32.74S-1。在后续的性质摸索中发现其最适ph最适温度分别为9.0与42℃。在探索纯化后的尿酸氧化酶的热稳定性时候发现其能在40℃孵育90小时后仍能保持79.75%的活性,其具有一定的热稳定性。我们的研究发现了一种新的尿酸氧化酶,其与其他尿酸氧化酶比较有较高的酶活与一定的热稳定性,这为之后研究或应用尿酸氧化酶提供了一个新的选择。