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海参溶菌酶存在于海刺参的各个组织中,由于海洋高盐、高压、低温等独特的地理环境使得该酶具有了其它陆地生物来源的溶菌酶所不具备的特点,目前对海参溶菌酶的研究多是构建海参溶菌酶大肠杆菌基因工程菌,但大肠杆菌作为表达菌株会产生包涵体,分离纯化比较困难,生产成本较高等问题,这也是目前该酶在工业上难以推广的原因。枯草芽孢杆菌是一种益生菌,对人体无致病性,有较强的胞外分泌能力,且外源蛋白不会经过大肠杆菌包涵体复性,因此简化了外源蛋白的分离纯化。本研究采用缺失了 6种胞外蛋白酶的枯草芽孢杆菌WB600作为表达宿主,以实验室保存的pMD18T-SjLys的质粒DNA为模板,扩增出海参溶菌酶目的基因SjLys,构建了重组克隆质粒pMD18T-Simple-SjLys,将重组克隆质粒pMD18T-Simple-SjLys和表达载体pHT43分别用限制性内切酶BamH Ⅰ和SmaⅠ进行双酶切,回收纯化后进行连接,构建重组表达质粒pHT43-SjLys,将构建好的重组表达质粒pHT43-SjLys转入枯草芽孢杆菌感受态细胞WB600中,构建了重组海参溶菌酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌,并对此基因工程菌进行生长曲线的测定和稳定性分析。结果表明,海参溶菌酶基因特异引物在400bp处扩增出特异性条带,与预期的海参溶菌酶基因大小一致;重组表达质粒pHT43-SjLys经双酶切验证得8000 bp和400 bp左右的片段;重组海参溶菌酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌与原始菌株WB600相比生长趋势基本一致,外源基因的插入对菌体的生理代谢未造成太大影响;在无选择压力的条件下,重组质粒的稳定性良好,连续传5次后的遗传稳定性为94%,并且提取质粒和双酶切验证后发现工程菌没有发现重排或丢失现象。表明重组海参溶菌酶基因工程菌pHT43-SjLys/WB600 构建成功。