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背景:
卵巢癌是引起妇女死亡的第五大肿瘤，占妇科肿瘤死亡的第一位，复发和耐药是治疗的重点和难点。早在1977年Hamburger‘等人在实验中发现仅有一部分卵巢癌细胞在体外培养中可以形成克隆，提出了实体瘤中存在肿瘤干细胞的学说，这些细胞对化疗和放疗不敏感，是引起肿瘤复发和转移的“种子细胞”。目前，在缺乏干细胞标记物及有效示踪方法的情况下肿瘤干细胞的生物学特征仍难以描述，更多的观点是基于现象的分析和理论的推测。
目的:
构建卵巢癌原位移植瘤模型，并利用该模型探讨肿瘤标记物CA125和卵巢肿瘤干细胞的关系，从而为靶向性、特异性杀死肿瘤干细胞，并防治肿瘤的复发和转移提供理论基础。
(一)、构建动物模型方法
1、通过对106只有正常解剖结构的雌性昆明鼠卵巢操作得出，小鼠单侧卵巢最大承受的溶液量约为20μl，10μl为安全剂量即注射完毕后观察10min卵巢膜完整且注射部位无渗漏现象；
2、注射细胞悬液前6天预处理小鼠：腹腔注射依托泊苷，同时在颈部皮下用套管针放置一小块雌激素缓释片；
3、收集对数生长期卵巢癌细胞OVCAR3，流式细胞仪检测CA125的表达；
4、细胞活力检测后计数制成1×10<5>/10μl和2×10<4>/10μl细胞悬液各50μl；
5、10只NOD/SCID小鼠随机分成两组，每组五只。麻醉后取其俯卧位，打开皮肤，腹膜，暴露右侧卵巢，利用微量注射器由右侧子宫角进针入右侧卵巢，注入10μl细胞悬液，每个细胞数量级设5只小鼠，撤出注射器后关腹；
6、观察小鼠成瘤情况，3个月后杀死小鼠取出双侧卵巢及腹腔其他器官，行常规病理切片，免疫组织化学染色等。
结论:构建卵巢的动物模型的方法简单易行，10μl为最佳容积，2×10<4>/10μ为最佳细胞浓度；
(二)、探讨肿瘤标记物CA125与卵巢肿瘤干细胞的关系方法
1、同法预处理小鼠；
2、取手术室切除的上皮性卵巢癌标本，制成细胞悬液；
3、细胞计数并行活力检测，用不同的荧光标记：
(1)、抗CA125(OC125)标记卵巢癌中表达CA125的细胞，别藻蓝蛋白(APC)标记二抗；
(2)、异硫氰酸荧光素(FITC绿光)标记线性抗体(抗-CD2，-CD3-CD10，-CD16，-CD14，-CD18，-CD19，CD31、-CD64)，藻红蛋白(PE 28D4橙色光)标记CD140b，均用于去除人的正常细胞；
(3)、PI(自发红色荧光，分选时可与APC分开)标记死细胞3、无菌流式分选分别收集CA125表达阴性或阳性的细胞：阳性细胞共得：1.52×10<4>阴性细胞共得11.1×10<5>收集阳性细胞并行细胞活力检测后计数，悬于HBSS/Matrigel混合液(1∶1)中制成不同的细胞浓度2×10<4>/10μl和1×10<4>/10μl，制取相同数量级的阴性细胞，余弃去；
4、将得到的阳性细胞和阴性细胞分别原位注射到SCID小鼠的一侧卵巢，每个浓度注射5只SCID小鼠；另设10只同一批小鼠为实验对照即：向每只小鼠的右侧卵巢注射10μHBSS/Matrigel混合液(1∶1)；再取同一批小鼠10只做空白对照，SPF条件下继续饲养，观察成瘤性；
5、观察3个月后取出双侧卵巢及腹腔其他器官，常规行病理切片和免疫组织化学染色等。
结论:CA125+的细胞能成瘤，CA125-的细胞不能成瘤，CA125可能是卵巢肿瘤干细胞标记物之一。