【摘 要】
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目的:外伤、先天畸形、手术等因素导致的软组织缺损和局部组织凹陷畸形是整形外科领域一直亟待解决的问题。近些年来,为解决组织量缺失的问题,各种人工填充材料不断被探索改进,与人工材料相比,自体脂肪材料因为排斥反应小、相容性好、提取方便等优势,而成为安全有效的填充物,已用于修复软组织轮廓畸形、乳房再造、毛发再生、抗衰除皱等,但自体移植物的不可预测性、高吸收率等问题也随之出现。脂肪移植物中的主要细胞包括脂肪
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目的:外伤、先天畸形、手术等因素导致的软组织缺损和局部组织凹陷畸形是整形外科领域一直亟待解决的问题。近些年来,为解决组织量缺失的问题,各种人工填充材料不断被探索改进,与人工材料相比,自体脂肪材料因为排斥反应小、相容性好、提取方便等优势,而成为安全有效的填充物,已用于修复软组织轮廓畸形、乳房再造、毛发再生、抗衰除皱等,但自体移植物的不可预测性、高吸收率等问题也随之出现。脂肪移植物中的主要细胞包括脂肪细胞、基质细胞、各种免疫细胞、以脂肪干细胞（adipose derived stem cells,ADSCs）为代表的各类干细胞等。ADSCs具有来源广、易提取、易培养、可多向分化等优点,并可分泌多种细胞因子,调控ADSCs细胞或靶向调控临近细胞的各种生物学行为。脂肪因子chemerin是脂肪组织分泌的一种蛋白,已被证实在炎症反应、调节脂肪细胞分化、代谢疾病、心血管疾病等领域发挥作用。目前,国内外学者对于chemerin的研究多数停滞于脂肪组织、脂肪细胞层面,对于chemerin在干细胞领域的研究仍处于起步阶段。本实验旨在分离提取并鉴定小鼠ADSCs,ELISA实验检测小鼠P3代ADSCs的chemerin蛋白分泌情况;对ADSCs成脂诱导,分别于诱导第0、1、3、7、14、21天取上清液行ELISA检测,检测ADSCs成脂分化过程中chemerin蛋白分泌量的变化情况。研究方法:1、C57BL/6小鼠双侧腹股沟区脂肪组织中分离提取原代ADSCs,通过细胞培养技术进行传代培养;2、用成骨、成脂诱导液分别诱导ADSCs促进其定向分化,通过油红O与茜素红染色后细胞形态学表现来鉴定ADSCs,采用抗体CD44、CD105、CD90、HLA-DR、CD45流式细胞术鉴定细胞表型;3、ELISA实验检测P3代ADSCs是否分泌chemerin,检测ADSCs成脂分化第0、1、3、7、14、21天chemerin蛋白水平的变化情况。结果:1、成功分离提取出小鼠ADSCs并培养至P3代,镜下形态表现为长梭形;2、小鼠ADSCs在成脂诱导以后出现脂肪小滴,油红O染色呈红色;在成骨诱导以后出现矿化细胞团块结节,茜素红染色表现为紫红色;流式细胞仪检测结果显示:CD44、CD105、CD90抗体阳性,HLA-DR、CD45抗体阴性,符合ADSCs的表型。成功鉴定脂肪干细胞;3、ELISA实验检测证实小鼠P3代ADSCs能够分泌少量的chemerin蛋白,平均值为0.47985±0.00151ng/ml;随着ADSCs成脂诱导分化,chemerin蛋白分泌量增加,在成脂诱导第21d时,chemerin的分泌量达3.644±0.176ng/ml。结论:ADSCs培养及成脂分化过程中可分泌chemerin蛋白,且随着ADSCs成脂分化成熟,chemerin蛋白分泌量逐渐增加。
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