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目的通过观察苗药金乌健骨方对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-HFLS)细胞抑制率、细胞凋亡率、IL-17信号通路核因子kappa B激活因子1(ACT1)肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白及相关炎症因子TNF-α、IL-1α、IL-1β、 IL-6、IL-17表达的影响,探讨金乌健骨方对类风湿关节炎(RA)患者IL-17信号的作用机制。方法1、含药血清制备将36只健康清洁级新西兰大白兔随机分为6组,即空白对照组、金乌健骨方高、中、低剂量组、强的松对照组和雷公藤多苷对照组,每组6只,除空白对照组外,其余各组予相应药物混悬液灌胃,连续给药3d后,于无菌条件下心脏取血,分离血清,真空干燥形成冻干粉,置4℃保存备用。2、采用MTT法检测不同浓度金乌健骨方含药血清冻干粉对RA-HFLS生长抑制情况。流式细胞仪检测各组RA-HFLS的凋亡率。ELISA法检测不同含药血清处理的细胞培养上清液中TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6及IL-17的表达水平。PCR法检测各组细胞ACT1、TRAF6mRNA表达。结果1、MMT检测结果空白对照组RA-HFLS持续增殖；在含药血清干预48h后,与空白对照组对比,随着金乌健骨方含药血清浓度的升高,OD值逐渐降低,抑制率逐渐升高。2、流式细胞仪检测结果金乌健骨方高、中、低剂量组和阳性药对照组细胞凋亡率增加,与空白对照组和兔血清对照组比较,均具有统计学意义(P<0.01)。在一定范围内,金乌健骨方诱导RA-HFLS凋亡呈剂量依赖性,随着干预浓度升高,诱导凋亡能力增强。与雷公藤多苷对照组比较,金乌健骨方低、中、高剂量组均表现出更强的促凋亡作用(P<0.01)。与强的松对照组比较,金乌健骨方中剂量组促凋亡作用无明显差异(P>0.05),而金乌健骨方高剂量组促凋亡作用更强(P<0.01)。3、ELISA检测结果干预48h后,与空白对照组或者兔血清对照组比较,各组细胞培养上清液中IL-17、IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6表达水平均有所下降,具有统计学差异(P<0.01)。金乌健骨方不同剂量组均可以下调IL-17、IL-1α IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白的表达水平。与雷公藤多苷对照组比较,金乌健骨方中剂量组IL-17、IL-1α、IL-1β表达水平更低(P<0.01),但对TNF-α、IL-6表达无明显差异(P>0.05)；金乌健骨方高剂量组对IL-17、IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6表达下调作用更明显。与强的松对照组比较,金乌健骨方高剂量组具有显著统计学意义(P<0.01),作用强度优于强的松；而金乌健骨方中剂量组下调IL-17、 IL-1α、IL-1β、IL-6表达的作用与强的松对照组无明显差异(P>0.05)4、RT-PCR检测结果干预48h后,与空白对照组或兔血清对照组比较,不同药物干预RA-HFLS后TRAF6、ACT1 mRNA的表达量均有所下降,具有明显的统计学差异(P<0.01)。与雷公藤多苷对照组比较,金乌健骨方中、高剂量组TRAF6、ACT1 mRNA的表达量更低,具有统计学意义(P<0.01)；与强的松对照组比较,金乌健骨方中剂量组TRAF6、ACT1 mRNA的表达量无明显的差异性(P>0.05),但高剂量组对TRAF6、ACT1 mRNA下调作用更显著(P<0.01)。结论1、金乌健骨方含药血清能够抑制RA-HFLS的增殖,促进RA-HFLS的凋亡,其作用在一定范围内,呈剂量依赖性。2、金乌健骨方可以下调RA-HFLS培养上清液TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6及IL-17的表达水平,降低ACT1、TRAF6mRNA的表达。3、金乌健骨方作用机制可能是通过下调IL-17信号中唯一衔接蛋白ACT1及其关键底物TRAF6 mRNA表达水平,抑制IL-17信号活化,减少炎症细胞因子释放,抑制RA-HFLS增殖,促进其凋亡,继而发挥治疗RA作用。