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目的 探讨自噬在糖基化终产物受体（Receptor for Advanced Glycation End Products，RAGE）/半乳糖凝集素-3 （Galectin-3，Gal-3）介导羧甲基赖氨酸（Nε-carboxymethyl-Lysine，CML）调控钙化转归中的作用。 方法 （1） 临床研究 选择2016年7月至12月在江苏大学附属医院心内科确诊或疑诊为冠心病的糖尿病患者，根据冠状动脉螺旋 CT（Coronary Computed Tomography Angiography，CCTA）对冠脉进行钙化评分，分为对照组、轻度钙化组、中度钙化组、重度钙化组。统计分析各组性别、年龄、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、总胆固醇、空腹血糖、血清 CML、钙化积分。 （2） 体外实验 首先观察 CML 对 A7r5 细胞钙化、自噬蛋白表达及钙化形态的影响；其次观察RAGE、Gal3沉默表达对A7r5细胞钙化、自噬蛋白表达及钙化形态的影响；最后探讨 RAGE、Gal3 沉默表达联合或不联合自噬抑制剂巴弗洛霉素A1 对 A7r5 细胞钙化、自噬蛋白表达、钙化形态、自噬流的影响。相关研究方法包括：茜素红染色、免疫荧光染色、Western blot等。 （3） 体内实验 6周龄ApoE-/-雄性小鼠普食喂养一周后，予腹腔注射STZ 40 mg/kg/day×5天，2周后血糖>16.7 mmol/L的小鼠纳入本研究。首先观察CML对粥样斑块钙化及自噬的影响，分组如下：对照组（普食， n=5）、模型组（高脂肪饮食，n=5）、CML组（高脂肪饮食+尾静脉注射CML， n=5）；其次在CML组处理的基础上，经左心室注射RAGE、Gal3沉默表达载体联合或不联合灌胃注入自噬诱导剂雷帕霉素（rapamycin，rapa），观察RAGE、Gal3、自噬诱导剂对糖尿病动脉粥样斑块钙化及自噬的影响，分组如下：对照组（高脂肪饮食+CML， n=5）、自噬激动组（高脂肪饮食+CML+rapamycin， n=5）、RAGE阻断组（高脂肪饮食+CML+RAGE沉默表达载体， n=5）、RAGE 阻断+自噬激动组（高脂肪饮食+ CML +RAGE沉默表达载体+rapamycin， n=5）、Gal3阻断组（高脂肪饮食+CML +Gal3沉默表达载体， n=5）、Gal3阻断+自噬激动组（高脂肪饮食+CML+Gal3沉默表达载体+rapamycin， n=5）。连续饲喂6个月后处死小鼠，进行血清学（血糖血脂，血清学CML），形态学（HE、Von kossa、免疫组化、TRAP染色）及分子生物学分析。 结果 （1） 同对照组比较，各钙化组血清FBG、TC、TG、LDL-C、CML显著增高， HDL-C 水平均显著减低，其差异有统计学意义（P<0.05）；且随着钙化积分的增加，轻度、中度、重度钙化组的FBG、TC、TG、LDL-C、CML逐渐增加，HDL-C逐渐降低，三组之间差异有统计学意义（P<0.05）。 （2） 对照组患者冠脉几乎无动脉粥样斑块及斑块钙化，而各钙化组冠状动脉壁均可见不同程度的斑块钙化；随着钙化积分的增加，冠状动脉斑块钙化的数量增多，冠脉钙化不仅仅局限于一支病变，往往呈现多支病变。 （3） 血清CML水平与冠状动脉粥样硬化斑块钙化积分呈正相关（r=0.9917， P＜0.0001）。 （4） CML促进A7r5细胞钙化，上调钙化细胞Runx2、LC3Ⅱ的表达。 （5） 沉默表达 RAGE 后，细胞呈典型大钙化、钙化灶数量减少；沉默表达Gal3后，细胞呈典型微钙化、钙化灶数量增多。 （6） CML诱导自噬，但抑制自噬流；沉默表达RAGE、Gal3后自噬流受阻得到缓解；抑制自噬后，VSMCs钙化及TRAP、TNAP表达增加，但RAGE、Gal3表达较未干预自噬抑制剂组相比无统计学差异。 （7） 各组可见小鼠主动脉粥样斑块形成，纤维帽下脂质池内尖菱型胆固醇晶体增多。CML组小鼠主动脉粥样斑块钙化增多、胆固醇结晶数量增多，斑块内大量骨样细胞形成。 （8） 沉默表达 RAGE 组，小鼠斑块呈钙化减少，呈典型大钙化；沉默表达Gal3 组，小鼠斑块钙化增多，呈典型微钙化；自噬激动组斑块内钙化相对相应未干预自噬激动组明显减少、胆固醇结晶也减少。 （9） 免疫组化染色及 TRAP 染色提示沉默表达 RAGE 组，小鼠斑块 Gal3、TNAP表达增多，RAGE表达较低、TRAP活性较低；沉默表达Gal3 组，小鼠斑块RAGE表达增多、TRAP活性增多，Gal3、TNAP表达较低； 自噬激动组斑块TRAP活性、TNAP表达相对相应未干预自噬激动剂组降低，但自噬激动组斑块RAGE、Gal3表达相对相应未干预自噬激动剂组无统计学差异。 结论 （1） 血清CML水平与冠脉粥样硬化斑块内钙化存在一定的相关性。 （2） CML通过RAGE/Gal3介导A7r5 SMCs钙化转归，CML通过抑制自噬小体与溶酶体结合以促进VSMCs钙化。 （3） CML通过RAGE/Gal3调控斑块内钙化转归，促进自噬减少斑块内钙化，但自噬可能不是RAGE/Gal3调控钙化转归的关键环节。