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BFBTS为一类抗肿瘤候选药物,是根据中美洲植物Petiveria alliacea中的效应成分BDBTS的结构进行修饰、系统筛选得到的抗肿瘤活性最好的候选化合物。药理学研究表明,BFBTS对多种人源肿瘤细胞以及耐药肿瘤细胞均具有显著的抑制增殖和诱导凋亡的作用,是极具开发前景的抗肿瘤候选新药。文献中关于三硫化合物的代谢、排泄研究很少,有关三硫化合物的代谢机制及其对生物大分子的代谢性影响鲜有报道。本文采用体内外模型对BFBTS在大鼠体内的代谢、排泄及体外代谢机制进行了研究,并根据其代谢性质,研究了BFBTS对生物大分子的代谢性相互作用。为BFBTS的临床开发应用及三硫类化合物的研究开发提供理论和实验依据。1. BFBTS在血中的代谢机制研究前期的稳定性实验及药动学研究表明,BFBTS在血中极不稳定,且在肝微粒体中几乎不代谢,因此本研究体外考察了BFBTS在血液中的代谢,确定了BFBTS的主要代谢部位,综合运用HPLC-UV、GC-MS、LC-MS等方法对BFBTS在血中的代谢产物进行了鉴定,考察了主要的代谢机制。结果表明：BFBTS在大鼠全血及红细胞中的代谢产物为BFBDS、p-FBM和ρ-FBA BFBTS在大鼠红细胞中的代谢速度很快,半衰期小于1min。对比BFBTS在大鼠血细胞及大鼠全血中的代谢产物p-FBM和p-FBA的生成曲线,结果代谢产物在大鼠红细胞与全血中的时间曲线基本一致,说明红细胞是BFBTS降解及代谢产物生成的主要部位。对BFBTS代谢因素的考察发现,内源性巯基物质,如还原性谷胱甘肽,半胱氨酸,辅酶A以及N-乙酰半胱氨酸对BFBTS都具有较强的降解能力。其中半胱氨酸和谷胱甘肽的活性最强。以碘乙酰胺作为评价巯基在BFBTS代谢中的作用,结果表明巯基在BFBTS的代谢中起着决定性的作用。使用不同规格的超滤管对红细胞中大分子物质参与BFBTS代谢的情况进行了考察,结果发现,大分子蛋白对进一步增强BFBTS的代谢有着重要贡献。通过对大鼠和人的红细胞中BFBTS代谢特征的考察,发现在大鼠红细胞中,BFBTS的代谢活性最强,人红细胞对BFBTS的代谢能力相对较弱。提示临床上,BFBTS的半衰期可能会延长。2. BFBTS血红蛋白结合研究采用红细胞为体外模型,运用HPLC-UV, MALDI-TOF, ESI-TOF, LC-TRQ技术研究了BFBTS同血红蛋白结合的情况。结果显示,在体外孵育体系中,当BFBTS达到250μmol/L以上时,检测到血红蛋白共价结合。经酶解分析,发现在250μmol/L时,大鼠血红蛋白Cys125β和Cys1O4/111α被修饰,修饰方式为半胱氨酸残基增加了一个分子量为140Da的对氟苄硫醇基团。当BFBTS达到500μmol/L时,除了Cys13α外的半胱氨酸残基均检测到修饰。体内实验发现,单次高剂量(50mg/kg)静脉注射BFTBS后,大鼠体内没有明显的血红蛋白结合产生,而当中剂量(25mg/kg)连续10天静脉注射后,在大鼠体内发现血红蛋白结合产物。但将人的红细胞与BFTBS(250μmol/L)进行孵育后,并没有检测到明显的蛋白修饰峰。该结果提示在人体内形成血红蛋白结合产物的可能性很小,血红蛋白对直接参与BFBTS代谢的贡献有限。3. BFBTS在大鼠体内的排泄研究建立了BFBTS和BFBDS在大鼠胆汁、尿液和粪便中的HPLC-UV分析方法,但是在大鼠尿液和粪便中没有检测到BFBTS和BFBDS,在大鼠胆汁中检测到极微量的BFBTS和BFBDS。采用HPLC-UV、GC-MS、LC-MS研究了BFBTS静注后大鼠尿液中主要的代谢产物,结果发现大鼠尿液中有两个主要的代谢产物,分别为对氟马尿酸和对氟苯甲酸,其中对氟马尿酸是最主要的代谢终产物。建立了HPLC-UV定量分析大鼠胆汁、尿液中对氟马尿酸和对氟苯甲酸的方法,并对BFBTS在大鼠体内的排泄进行研究,结果显示,以对氟马尿酸和对氟苯甲酸作为代谢产物,12.5mg/kg单次静脉注射BFBTS后,大鼠尿液中累计排泄率达到67%,胆汁中约4%。4.BFBTS对药物外排转运体的影响使用SRB法比较了BFBTS及其代谢产物BFBDS、p-FBM对肿瘤细胞株HepG2、H460、K562、K562/adr、MCF-7、MCF-7/adr的细胞毒性,结果显示BFBTS具有最显著的抗肿瘤活性,并且BFBTS及其代谢产物对肿瘤细胞敏感株及多药耐药株的作用无显著差异。采用MDCK-MDRl细胞和LLC-PK1-BCRP细胞作为体外模型,考察BFBTS、BFBDS、p-FBM对P-gp, BCRP活性的影响。使用罗丹明123作为考察P-gp的经典底物,使用米托蒽醌作为考察BCRP的经典底物。积聚实验显示BFBTS对R123在MDCK/MDRl细胞内的积聚有微弱的促进作用,而转运实验显示,BFBTS不能抑制R123的外排。BFBTS及其代谢产物对米托蒽醌在LLC-PK1-BCRP细胞中的积聚没有显著的促进作用,显示BFBTS对BCRP功能没有影响。非变性Westemblot显示,短期给予BFBTS、BFBDS虽然能改变BCRP的多聚体状态,但对BCRP功能没有影响。综上可见,BFBTS及其代谢产物BFBDS和p-FBM对外排转运体没有影响。