论文部分内容阅读
本研究分别提纯了胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilus pleuropneumoniae，APP)血清1～10型的荚膜多糖抗原和脂多糖抗原，建立了检测APP型特异性抗体的间接ELISA。通过血清型间的交叉反应试验，筛选出各血清型菌的最佳型特异性抗原，为APP的准确诊断与分型提供新的方法。分别提取APP的荚膜多糖抗原和脂多糖抗原用于建立检测各型抗体的间接ELISA，通过ELISA反应条件的优化，确定了最佳反应条件：荚膜多糖抗原包被浓度为13μg／mL，脂多糖抗原包被浓度为11μg／mL；封闭液为含1％牛血清白蛋白(BSA)的0.01mol／L pH7.4的PBS，37℃封闭60min；血清工作条件为200倍稀释，37℃孵育60min；辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)工作条件为4000倍稀释，37℃孵育30min；阻断试验表明：荚膜多糖和脂多糖均能阻断该型阳性血清与相应包被抗原的反应，具有特异性。初步确定了判定标准：以P／N值≥2.1判定为阳性，P／N＜2.1判定为阴性。重复性实验表明该法重复性较好。以APP各血清型菌的荚膜多糖和脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA检测各血清型菌的阳性血清，1型和4型的荚膜多糖及2型和10型的脂多糖只与同型菌的阳性血清反应，与其它型阳性血清不反应，以这四种抗原建立的间接ELISA具有良好的型特异性，可用于检测APP1型、2型、4型和10型的抗体，而其它各型的荚膜多糖和脂多糖与异型血清具有不同程度的交叉反应。以APP1型和4型的CPS及2型和10型的LPS作为包被抗原建立的间接ELISA进行了临床初步应用，联合检测了疑似APP猪血清11份，检测出APP1型5份，4型3份，2型2份，10型3份，而且，存在同一只猪感染几种APP血清型的情况。