Hfq调控十字花科黑腐病菌运动机理研究

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Hfq(Host factor for Qβ)蛋白作为细菌的全局转录后调控因子,在细菌的运动、趋化、致病和群体感应等中发挥着重要的调控作用。本实验室之前的研究发现,编码Hfq的基因(hfq)缺失导致十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的涌动能力几乎丧失,但机制不明。转录组数据显示,4个推测与运动相关的基因(fim T、pilV、pilY和pilE1)的m RNA水平在hfq缺失突变体中显著提高。本研究推测,Hfq可能是通过调控这4个基因的表达来控制Xcc的涌动。为了验证这一推测,本研究首先采用RT-PCR方法对转录组数据进行了验证。结果显示,在hfq缺失突变体中,这4个与运动相关的基因fim T、pilV、pilY和pilE1的m RNA水平比野生型菌株显著提高,证明了转录组数据的正确性,也说明fim T、pilV、pilY和pilE1受Hfq负调控。接着采用Western的方法对基因fim T、pilV、pilY和pilE1的蛋白表达量进行检测,检测结果进一步证明了这一结论。为了明确fim T、pilV、pilY和pilE1是否真的与Xcc的运动有关,本研究采用“缺失突变体构建→表型检测→功能互补”策略,对这4个基因进行了生物学功能鉴定。结果显示,fim T、pilV、pilY和pilE1缺失突变体的涌动能力比野生型显著增强,而互补菌株的涌动能力与野生型相似,证明fim T、pilV、pilY和pilE1具有抑制Xcc涌动的功能。这些结果解释了hfq突变体涌动能力下降的原因:hfq缺失导致fim T、pilV、pilY和pilE1这4个抑制涌动的基因的高表达,而fim T、pilV、pilY和pilE1具有抑制Xcc涌动的功能,从而导致Xcc涌动能力的下降。此外,本研究还发现,运动相关基因pilV的缺失突变体致病性较野生型显著下降,互补菌株的致病性与野生型相似。表明运动相关基因pilV对Xcc的致病力具有正向作用。运动相关基因pilE1缺失突变体的游动能力较野生型显著增强,互补菌株的游动能力与野生型相似,表明运动相关基因pilE1具有抑制Xcc游动的功能。综上,本研究取得了以下创新成果:(1)揭示了Hfq调控Xcc运动的一个机制;(2)鉴定了4个与Xcc涌动相关的新基因;(3)发现pilV与Xcc的致病相关。这些成果增加了人们对Hfq的作用机制、Xcc的运动调控机制,以及Xcc的致病机理的了解。
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