钙调蛋白磷酸酶催化亚基、催化核心去折叠动力学及调节因素对其稳态变性作用的研究

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本文的主旨是尽量从去折叠途径研究中获得更多关于钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)的构象信息。 第一部分是关于催化亚基CNA和催化核心CNa的去折叠动力学研究。观察二者在不同浓度尿素中的去折叠动力学过程。结果显示CNA在不同浓度的尿素中的构象有不同程度的松散,松散程度随尿素浓度增加而增大,说明CNA本身构象就很紧密。CNa在变性过程中构象先紧缩后松散,说明CNa的原始构象相当松散,尿素对CNa整体构象有影响,但不是单纯的解折叠。酶活力上,CNA受各个尿素浓度的激活,而CNa在任何尿素中都没有观察到激活,说明CNa的构象已经处于对pNPP的最适构象,而CNA的构象并不是催化pNPP的最适构象。 第二部分使用稳态变性的方法研究CaM、Ca<2+>和Mn<2+>在CNA稳态变性作用的影响。三种调节成分通过不同的组合方式分别加入CNA的稳态变性体系,结果发现三种成分在作用过程中会相互影响,Ca<2+>可以影响CaM对CNA的作用;CaM可以影响Mn<2+>对CNA的作用;当CaM与Ca<2+>结合后,CaM无法影响Mn<2+>对CNA的作用,但CaM仍然对CNA有作用。 第三部分研究Mn<2+>对CNa、CNA和BA稳态变性作用的影响。结果显示Mn<2+>在三种蛋白稳态变性作用中的影响都非常明显。Mn<2+>对三种蛋白均有激活作用,而且它的激活同尿素的激活作用可以叠加,说明Mn<2+>的激活途径与尿素不同, Mn<2+>很有可能是通过结合到活性中心来实现其激活作用。 第四部分是关于CNa复性的一些摸索。结果显示在8M尿素变性初始时刻稀释复性可以恢复部分酶活力,如果变性时间过长,则无法通过稀释复性。Ca<2+>和Mn<2+>有助于复性。
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