【摘 要】
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反义RNA技术主要内容是根据碱基互补原理,用人工合成或生物体合成地特定互补的DNA或RNA片断(或化学修饰产物)抑制或封闭基因表达的技术.主要包括反义DNA技术、反义RNA技术和
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反义RNA技术主要内容是根据碱基互补原理,用人工合成或生物体合成地特定互补的DNA或RNA片断(或化学修饰产物)抑制或封闭基因表达的技术.主要包括反义DNA技术、反义RNA技术和核酶技术等.反义技术是近年来发展起来的,通过高效率选择性的封闭某一特定基因,抑制目的基因的转录或翻译,降低所编码蛋白的表达,从基因水平达到抑制基因表达的目的.在木质素苯丙酸类生物合成途径中,香豆酸连接酶被认为起着重要的应激酶作用,催化香豆酸、咖啡酸、阿魏酸转化为相应的辅酶A形式,促进木质素单体的合成.研究发现,4-香豆酸连接酶在植物体内的含量变化会影响植物木质素含量的变化.该研究将从刺槐中克隆得到的定位于形成层表达的GRP1.8启动子,与GUS报告基因连接构建融合基因插入到植物表达载体pBI101中,农杆菌介导的叶盘法转基因烟草,转基因植株组织化学检测表明,GUS基因成功地由GRP1.8启动子驱动定位于形成层表达.GRP1.8启动子与来自毛白杨的4-香豆酸连接酶的cDNA克隆(4CL1),反义构建成GRP1.8—anti-4CL1融合基因,在基因构建的过程中,采用了一种在基因构建中未见报道的方法进行连接,构建融合基因,相比传统的构建方法具有简便,构建率高的特点.同时将融合基因插入到能用于植物转化和表达的二元质粒载体pBI101中,并用于转化烟草.转基因的烟草幼苗与对照相比,融合基因GRP1.8—anti-4CL1的表达明显地改变了转基因烟草植株的木质素和纤维素的含量和比例.转基因烟草的木质素含量较对照平均降低了13.7％,转基因植株的纤维素含量较对照升高了15.6％,但是总量基本保持稳定.
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