围产期山羊子宫颈糖皮质激素受体、合成酶定位及脂肪细胞定位研究

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糖皮质激素是哺乳动物分娩启动的重要激素,不仅可以引起子宫收缩力的改变,通过多种途径参与分娩,而且在分娩启动时各种激素间相互协调中发挥着枢纽作用。它主要由肾上腺皮质分泌,现已证明其他部位如胎盘、卵巢、子宫等组织器官也可分泌,包括皮质醇和皮质酮,牛、羊等所分泌的90%以上是皮质醇。糖皮质激素必须与其受体相结合才能发挥作用。糖皮质激素受体分为GRα和GRβ,主要以GRα形式存在。参与糖皮质激素活性转化的酶类主要是11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)。11β-HSD分为11β-HSD1、11β-HSD2两种。11β-HSD1是氧化还原酶,以还原作用为主,可使无活性的可的松还原为有活性的皮质醇。11β-HSD2是专一性氧化酶,使有生物活性的皮质醇转变为无活性的可的松。目前国内外就糖皮质激素受体、合成酶在围产期山羊子宫颈中的定位以及mRNA表达与分娩前后子宫颈收缩和舒张的关系是否一致的研究较少,资料仍然缺乏。为了阐述上述问题,本试验分别采集健康山羊产前两天、产前一天、分娩期、产后一天以及产后两天的子宫颈,用Western Blot法检测兔抗人糖皮质激素受体蛋白(NR3C1)多克隆抗体,兔抗人11β-HSD1多克隆抗体及兔抗人11β-HSD2多克隆抗体在围产期山羊子宫颈组织中的特异性;用免疫组织化学法分别对NR3C1、11β-HSD1和11β-HSD2进行定位;用RT-PCR法检测NR3C1、11β-HSD1、11β-HSD2mRNA的相对表达水平;用油红O染色法来检测各时期子宫颈中脂肪细胞的分布。结果显示:NR3C1、11β-HSD1、11β-HSD2在围产期山羊子宫颈中除黏膜上皮和浆膜层外均有分布,以子宫颈平滑肌和血管平滑肌中分布最多。通过检测其阳性率可发现NR3C1、11β-HSD1在分娩期最多,而11β-HSD2在产后一天最多。NR3C1、11β-HSD1mRNA在分娩期表达水平最高,而11β-HSD2mRNA表达水平在产后一天最高。脂肪细胞在整个围产期均有分布,主要存在于山羊子宫颈的肌间、血管、腺管基底层以及黏膜上皮下。在分娩期为大脂滴,其他四期为小脂滴。结果表明,脂肪细胞中的脂滴由小变大为分娩时子宫颈扩张提供能量,同时脂肪细胞中含有甘油和胆固醇酯,而胆固醇是合成类固醇激素的原料,而且试验证明了子宫颈本身含有糖皮质激素的合成酶与受体,并且阳性率与mRNA表达水平相一致,这就证明子宫颈是一个独立的内分泌组织,能合成与分泌糖皮质激素。血管和子宫颈平滑肌中的糖皮质激素受体与合成酶的含量在分娩期时最多,意味着合成的糖皮质激素多,然后作用于本身,从而使得子宫颈舒张。此外,糖皮质激素含量增多会刺激雌激素分泌增多,进而使前列腺素分泌增多,使子宫收缩、子宫颈舒张,以使胎儿正常分娩。
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