心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）是造成全球死亡的首要原因。纳豆激酶具有多种有利于心血管的作用,如纤维蛋白溶解活性、抗血栓、抗高血压、抗动脉粥样硬化、降血脂、抗血小板和神经保护等。因此,它是预防和治疗心血管疾病的理想药物。目前野生型纳豆芽孢杆菌生产纳豆激酶的产量较低,且下游分离纯化工艺困难,这将限制了纳豆激酶的应用。本论文通过基因工程技术构建了WB800N/p HT43-apr N和WB800N/p HT43-pro-apr N重组纳豆激酶枯草芽孢杆菌菌株,并对前导肽与纳豆激酶活性之间的关系进行了研究。通过琼脂糖-纤维蛋白法和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对基因工程菌株表达重组蛋白进行了纤溶酶活和表达量分析,并使用单因素和响应面法分别优化了重组菌株的表达条件以及其发酵培养条件,最终得到了一株具有高效表达NK的枯草芽孢杆菌基因工程菌株。本研究具体内容如下:（1）构建枯草芽孢杆菌重组菌株。以实验室筛选的纳豆杆菌基因组为模板,设计引物扩增了编码纳豆激酶的apr N和pro-apr N基因片段,以p HT43质粒作为载体,分别转入宿主细胞WB800N中进行表达。通过琼脂糖-纤维蛋白平板法和SDS-PAGE电泳法对表达产物进行了分析,结果表明前导肽介导纳豆激酶的正确折叠功能。（2）对高效分泌表达的重组菌株WB800N/p HT43-pro-apr N进行表达条件优化。通过单因素实验,确定了最优表达条件。温度为37℃,培养基初始p H为7.5,当细胞密度OD_600nm达到0.6时,加入1 m M IPTG诱导剂,诱导发酵4小时后,纳豆激酶最大粗酶活达到848.52 IU/m L。这表明p HT43载体和WB800N宿主细胞是成功实现纳豆激酶高效表达的枯草芽孢表达系统。本次构建的工程菌株为纳豆激酶工业化生产奠定了基础。（3）重组菌株WB800N/p HT43-pro-apr N的发酵条件优化。通过单因素实验和响应面Box-Behnken模型优化发酵培养参数,经五因素三水平的响应面分析表明最佳发酵培养条件为:蛋白胨26.05 g/L,葡萄糖29.29 g/L,Mg SO4 1.5 g/L,Ca Cl20.74 g/L,Na Cl 10 g/L,p H 7.5,接种量3%。在最优发酵培养条件下,纳豆激酶最高粗酶活达到2186.17 IU/m L,比优化前提高了269%。本次构建的工程菌株仅在诱导发酵4小时后,纳豆激酶能达到最大酶活,这明显地改善了未来纳豆激酶生产的工业化效率。SDS-PAGE分析结果显示,重组菌株表达杂蛋白相对较少,这将减少日后的下游分离纯化工艺,降低了工业化生产成本。总之,本研究中构建的工程菌株可用于工业化纳豆激酶的生产。