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经适当修饰改造的N-末端截断型脂多糖结合蛋白(truncated LBP,tLBP)是一种基因片段长约0.7kb，分子量27kDa，含有亲代分子197个氨基酸的多肽，在分泌至内质网时切割下N-末端25个氨基酸的信号肽。该分子保留了与LPS作用的结合域, 可能更有效地结合LPS，但不能转移LPS到CD14，从而可阻止LPS-CD14的形成，进而抑制单核/巨噬细胞过度分泌炎性细胞因子。发挥着与亲代分子LBP竞争结合LPS或中和LPS的作用，但有关tLBP的确切生物学活性以及与LPS的中和作用仍不十分清楚。本课题在已获得人LBP全长cDNA的基础上，设计了扩增tLBP基因的引物，成功克隆到目的基因片段，并顺利插入杆状病毒转移载体pFASTBAC以及完成了目的基因的特异转座和病毒重组，成功构建了杆状病毒表达系统。应用Sf21昆虫细胞和BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统、TALON金属鏊合层析等方法表达纯化了重组的人N末端脂多糖结合蛋白cDNA的表达产物，通过Lowry, SDS-PAGE, Western blot及毛细管电泳等方法对表达产物进行生化特性鉴定，经体外与LPS结合及细胞评价活性实验表明，纯化的重组人tLBP蛋白具有与LPS结合的能力，且在细胞水平显示出一定的结合或中和LPS的生物活性。在上述工作工作基础上，通过对昆明小鼠在内毒素LPS致伤与保护剂作用前后的动态对比观察，以及对小鼠LPS致死性攻击与保护的动物死亡率观察，结果显示重组的N端脂多糖结合蛋白（tLBP）对内毒素损害小鼠有一定的保护作用。提示tLBP可能结合或中和了部分LPS，从而减弱相关炎性细胞因子和介质的释放。因此，经过体外细胞培养和动物在体实验的初步观察，表明重组人tLBP具有一定的生物活性。我们提出应用昆虫细胞/杆状病毒表达系统，重组蛋白tLBP可以正确地折叠并形成类似于人天然N末端LBP的高级结构，并表达出类似原型分子的重组蛋白。主要实验结果如下：1．成功获得人N端脂多糖结合蛋白基因片段并经序列分析证实（约700bp），并顺利构建杆状病毒转移载体pFASTBACtLBP和穿梭载体pBacmidtLBP。经鉴定证实目的基因发生了特异转座和获得的病毒为特异的重组病毒。<WP=8>用BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统、Sf21昆虫细胞和TALON金属鏊合层析等方法表达纯化出重组的人N末端脂多糖结合蛋白，分子量27kDa，纯度大于98%，总产量为2.7mg。经体外与LPS结合、流式细胞仪观察、抗原性鉴定等实验，结果显示纯化的重组人tLBP蛋白具有与LPS结合的能力。3．tLBP蛋白在细胞水平显示出一定的结合或中和LPS的生物活性，细胞上清中细胞因子含量下降。由此提示经昆虫细胞表达的tLBP蛋白可以正确地折叠并形成类似于人天然N末端LBP的高级结构，因而具有一定的生物活性。4．动物在体实验的初步观察，发现重组的人tLBP蛋白在动物体内具有一定的结合或中和LPS的作用，动物死亡率下降，肝功能得到改善，内脏器官病变程度减轻，血清中释放的细胞因子降低，从而对动物内毒素性血症或致死性攻击有一定的保护作用。实验结果提示tLBP蛋白有可能研制成为一种抗LPS的新型制剂。5．本研究率先应用新型杆状病毒真核蛋白表达系统获得重组人截断型脂多糖结合蛋白，首次将该蛋白应用到内毒素动物模型进行体内生物活性研究。因此，该研究结果将对进一步弄清LBP的结构和功能，以及为创（烧）伤和临床感染的防治研究奠定良好的基础