乙型脑炎病毒（JEV）是一种危害严重的人畜共患传染病病原。JEV经蚊虫传播，主要侵害中枢神经系统并引发脑炎，但JEV复制和致病机理仍待深入解析。NS3蛋白是JEV的一种重要非结构蛋白，具有丝氨酸蛋白酶活性、RNA解旋酶活性和核苷5三磷酸酶（ATP酶）活性，在JEV复制和致病过程中发挥重要作用。深入研究JEV NS3蛋白与宿主蛋白的相互作用对于深入分析NS3蛋白功能、解析JEV复制和致病机理、开发新型抗病毒药物具有重要科学意义。本研究在真核细胞环境中筛选、鉴定了可能与JEV NS3互作的宿主蛋白，并对其相互作用的分子机制和功能作用进行深入分析，具体内容如下:　　1.JEV NS3单克隆抗体的制备　　使用纯化的JEV NS3原核表达蛋白免疫4-6周龄的Balb/C小鼠，通过细胞融合和4次亚克隆，最终得到2株能够稳定分泌NS3抗体的杂交瘤细胞株:1H7和2D4。通过Western blot和间接免疫荧光实验分析验证，所得到的这两株单抗均具有很好的特异性。　　2.与JEV NS3蛋白相互作用的宿主蛋白的筛选与鉴定　　利用串联亲和纯化（TAP）结合质谱分析的方法，在HEK293T细胞中筛选到3个可能与JEV NS3发生相互作用的宿主蛋白:核糖体小亚基蛋白11（RPS11）、腺嘌呤核苷酸转运蛋白2（ANT2）和真核翻译延伸因子(EEF1A1)，并通过免疫共沉淀对它们的相互作用进行了验证。　　3.JEV NS3蛋白与EEF1A1相互作用及其对JEV复制的影响　　利用IP-RT PCR的方法，发现EEF1A1可以和JEV复制复合体的主要组成成分NS3、NS5及基因组发生相互作用，荧光共聚焦显微镜显示EEF1A1可以和JEV NS3、NS5及病毒的双链RNA(dsRNA)发生共定位。病毒增殖实验表明EEF1A1可以正调控JEV的复制。进一步分析发现EEF1A1可以通过其分子伴侣样的活性降低宿主蛋白酶体对JEV NS3和NS5的降解作用，从而稳定病毒复制复合体的主要组成成分，促进JEV的复制。　　4.JEV通过miR-33a-5p调控EEF1A1的表达及病毒复制　　荧光定量PCR和Western blot验证了JEV感染可上调EEF1A1的表达。进一步研究发现JEV感染可以诱导宿主miR-33a-5p的表达下调，而miR-33a-5p则可通过靶向EEF1A1，调控EEF1A1的表达，并进而调控JEV的复制。并且，我们还发现JEV感染可以通过抑制miR-33a-5p宿主基因SREBP2的转录因子NF-Y和sp1的活性，从而在转录水平上调控miR-33a-5p的表达。　　本研究首次通过TAP的方法发现了三个与JEV NS3相互作用的宿主蛋白:RPS11、ANT2和EEF1A1，并对EEF1A1与NS3相互作用的功能进行了深入分析，揭示了EEF1A1在JEV复制过程中的作用机制，同时阐明了JEV调控EEF1A1表达的分子机制。以上结果，有助于我们更加深入的了解JEV的复制机理，同时也为抗JEV新型药物研发提供了重要科学线索。