猴B病毒(monkey B virus)也称为猴疱疹病毒1型(Cercopithecine herpesvirus 1)、B疱疹病毒(herpes B virus),属于α-疱疹病毒属,是一种严重危害人类健康的动物源性病原体。在自然宿主猕猴中感染率较高可达10%-60%,但多呈隐性感染；猕猴感染后可长期潜伏在三叉神经节和腰骶神经节,临床上仅在口腔或生殖器出现溃疡或无明显症状,类似于人感染了单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)。而猴B病毒对人的感染多为致死性,主要表现为脑炎、脑脊髓炎,严重的呼吸麻痹死亡,死亡率超过70%,幸存者会留下神经后遗症。目前,有关猴B病毒的疫苗制剂尚未成型,进行快速检测和早期诊断是防止猴B病毒危害的主要措施。医学临床上多采用与猴B病毒同源的HSV(人单纯疱疹病毒)、SA8(猴因子8)等病毒蛋白作为诊断抗原,但易出现假阳性和假阴性。猴B病毒被膜蛋白在吸附、膜融合和进入宿主细胞、病毒传播以及逃避机体免疫监视中发挥重要作用,在感染动物体内,被膜蛋白gB、gC、gD出现时间最早,驻留体内时间最长,具有较好的免疫原性和反应原性,是猴B病毒鉴别诊断和有效防治的理想靶点。1.我国四地区猕猴感染猴B病毒的流行病学调查为调查我国猕猴的猴B病毒的感染情况,采用免疫酶(IEA)方法检测了从四川、北京、海南、和广西收集的953份猕猴血清,统计了四个地区猴B病毒的感染率,并比较不同地区间猴B病毒感染的差异,结果显示210份血清检测为阳性,阳性率为22.04%,尽管某些养殖场猴群B病毒的感染率差异很大,如四川某养殖场猴B病毒的感染为10.37%,而北京某养殖场猴B病毒的感染率高达46.15%,但经统计学分析差异不显著。2.PCR法与免疫酶法(IEA)对猕猴感染猴B病毒的检测结果比较为更加有效的了解猴B病毒在动物机体的潜伏状态,以军事医学科学院实验动物中心饲养的22只猕猴为研究对象,根据猴B病毒E2490标准毒株UL1基因保守区和US6基因胞外区,设计特异性引物gL和gD,建立猴B病毒的PCR检测方法,比较PCR方法和免疫酶法检测结果的差异。22份猕猴血清样本经免疫酶法检测,13份呈阳性,阳性率为59.09%,而采用PCR方法只有4份猕猴样本呈阳性,阳性率为18.18%。二者检测结果的阳性符合率30.77%。提示猴B病毒的免疫酶法检测,只能确定猕猴群中猴B病毒的携带者,但猴B病毒在机体内是出于潜伏状态还是处于活跃增殖期,并不清楚。3.猴B病毒gC被膜蛋白的表达及纯化采用生物信息学软件DNANAN比较猴B病毒、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)3种α疱疹病毒中被膜蛋白gB、gC和gD的同源性差异,确定gC被膜蛋白为本实验的研究对象。基于猴B病毒基因组GC含量较高(73%)且含有大量的稀有密码子ccC、cgg、gga等因素,不利于目的基因的扩增和蛋白表达,故采用PCR从猴B病毒基因组DNA扩增和重叠PCR合成两种方法都获得目的基因,测序验证后插入原核表达载体pet-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得为50KDa以包涵体形式表达的gC重组蛋白。免疫印迹实验证实,猴B病毒阳性血清和his单克隆抗体能特异性的识别重组蛋白。4.猴B病毒膜蛋白gC-ELISA方法的建立以大肠杆菌表达的gC蛋白为包被抗原,建立用于检测猴B病毒抗体的间接ELISA法。通过对ELISA反应条件的优化比较,确定gC重组蛋白的最适包被浓度为1.5μg／ml,待测血清稀释度为1：10,兔抗猴IgG-HRP的工作浓度为1：25000。所建立的gC-ELISA法特异性良好,与单纯疱疹病毒1型和2型阳性血清都没无交叉反应。随机抽取的187份猕猴血清送美国猴B病毒检测实验室-中国代表处委托检验,与本次建立的gC-ELISA法检测的结果相比较,二者的符合率达96.3%。