【摘 要】
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该论文利用分子生物学技术,采用基因删除的方法使adh2基因失活,从而使乙醇不能氧化成乙醛,以期提高酵母菌产乙醇的产率.1.通过化学转化法,把一段对遗传霉素抗性的DNA片断转入
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该论文利用分子生物学技术,采用基因删除的方法使adh2基因失活,从而使乙醇不能氧化成乙醛,以期提高酵母菌产乙醇的产率.1.通过化学转化法,把一段对遗传霉素抗性的DNA片断转入酵母细胞中,与adh2基因的ORF(open reading frames)进行同源重组,经过抗性筛选,得到一株adh2基因突变的杂和双倍体菌株.2.由突变的杂和双倍体菌株,经过形成孢子,用蜗牛酶处理后,适当稀释,涂于含遗传霉素的平板上培养.选取较小的单菌落,进行再生孢子验证,获得了adh2基因被删除的突变单倍体菌株.3.用突变的杂和双倍体菌株,经过形成孢子、剖分、筛选,筛选时将稀释液,涂到不含遗传霉素的平板上,经培养挑取较小的单菌落,再生孢子验证不生子事宜,且于含抗生素的培养基中不生长,得到了原菌的单倍体菌株.以废糖蜜作培养基进行发酵,测乙醇的浓度和残糖量.发现在乙醇浓度方面,突变单倍体菌的达到最高值后,基本不再下降,而原菌单倍体菌的达到最高值后,有明显下降;在残糖量方面,突变的单倍体菌相对原菌的单倍体菌降得更低些.
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