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背景及其目的：精子载体法自运用于制备转基因动物以来，它具有操作简单和费用较少的特点；精子自发吸收外源DNA的天然特点，能使外源基因保持较好的完整性。慢病毒载体利用病毒能将基因整合进宿主细胞基因组，并能稳定遗传的特点，使之成为制备转基因动物的主要工具之一。将精子与慢病毒载体共同孵育，探讨外源基因带入精子细胞的效率，优化筛选出最佳条件，为制备转基因小型猪动物模型奠定基础，为相关研究参考依据。
方法:1)利用基因工程技术将目的基因SLC3A2序列片段连接到LV5载体上，构建其基因重组载体，然后进行病毒包装，最后用荧光定量PCR进行病毒滴度的测定。2)将含基因SLC3A2慢病毒载体与精子细胞在不同条件下进行孵育。1、不同浓度的(104IU/ml，105IU/ml，106IU/ml )慢病毒载体与精子细胞孵育；2、慢病毒载体与精子分别孵育不同时间(1h，2h，3h，4h)；3、慢病毒载体与精子分别在不同温度(17℃，25℃，37℃)下孵育；4、不同浓度(0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，15μg/mL)的Polybrene与慢病毒载体和精子孵育。3)利用免疫荧光法和半定量PCR法检测在不同条件下，慢病毒载体与精子孵育的转入外源基因的效率；4)用镜检法检测在不同条件下，慢病毒载体与精子孵育的精子细胞活力。
结果：1)构建了LV5-SLC3A2重组载体，通过酶切鉴定和测序报告判定载体构建成功。2)测定的慢病毒载体的平均滴度为2.03×108IU/ml。3)经过PCR和免疫荧光法检测后发现：SLC3A2在105IU/ml，106IU/ml条件下的水平较高；在孵育2小时后SLC3A2均有表达；SLC3A2在不同温度下均有表达；慢病毒载体和精子细胞与10μg/mL和15μg/mL的Polybrene孵育后，SLC3A2的水平最高。4)3h，4h组精子细胞活力显著低于1h组；17℃组的精子活力较高；15μg/mL的Polybrene和106IU/ml组的精子活力较低。
结论：1)成功构建了SLC3A2慢病毒载体。2)精子细胞和105IU/ml慢病毒载体在17℃条件下，与10μg/mL的Polybrene共孵育2h时，外源基因SLC3A2转导效率最佳。
方法:1)利用基因工程技术将目的基因SLC3A2序列片段连接到LV5载体上，构建其基因重组载体，然后进行病毒包装，最后用荧光定量PCR进行病毒滴度的测定。2)将含基因SLC3A2慢病毒载体与精子细胞在不同条件下进行孵育。1、不同浓度的(104IU/ml，105IU/ml，106IU/ml )慢病毒载体与精子细胞孵育；2、慢病毒载体与精子分别孵育不同时间(1h，2h，3h，4h)；3、慢病毒载体与精子分别在不同温度(17℃，25℃，37℃)下孵育；4、不同浓度(0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，15μg/mL)的Polybrene与慢病毒载体和精子孵育。3)利用免疫荧光法和半定量PCR法检测在不同条件下，慢病毒载体与精子孵育的转入外源基因的效率；4)用镜检法检测在不同条件下，慢病毒载体与精子孵育的精子细胞活力。
结果：1)构建了LV5-SLC3A2重组载体，通过酶切鉴定和测序报告判定载体构建成功。2)测定的慢病毒载体的平均滴度为2.03×108IU/ml。3)经过PCR和免疫荧光法检测后发现：SLC3A2在105IU/ml，106IU/ml条件下的水平较高；在孵育2小时后SLC3A2均有表达；SLC3A2在不同温度下均有表达；慢病毒载体和精子细胞与10μg/mL和15μg/mL的Polybrene孵育后，SLC3A2的水平最高。4)3h，4h组精子细胞活力显著低于1h组；17℃组的精子活力较高；15μg/mL的Polybrene和106IU/ml组的精子活力较低。
结论：1)成功构建了SLC3A2慢病毒载体。2)精子细胞和105IU/ml慢病毒载体在17℃条件下，与10μg/mL的Polybrene共孵育2h时，外源基因SLC3A2转导效率最佳。