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邻苯二甲酸酯(Phthalic acid esters, PAEs)是一种常见的增塑剂,普遍用于各种各样的塑料商品中。人类几乎每天都要接触到这些塑料制品。流行病学研究发现,随着邻苯二甲酸酯的广泛使用,过敏性皮炎的发病率也在显著升高,邻苯二甲酸酯暴露和过敏性皮炎的高发病率之间可能存在潜在的关联。研究发现一些传统增塑剂对人体健康具有很大危害。因此一些新型增塑剂得到了越来越广泛的应用,其中,邻苯二甲酸二异癸酯(diisodecylphthalate,DIDP)被广泛添加于各种生活用品中,主要经口暴露进入人体,如儿童可以从放入口中的玩具中摄入。虽然新型增塑剂如DIDP的毒性相对较小,但其广泛应用引起的免疫毒性值得我们关注和研究。然而,人们对DIDP影响过敏性皮肤炎症的效果还知之甚少,其作用机制尚不清楚。本课题以雄性Balb/c小鼠为实验对象,用0.5%异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)建立过敏性皮炎模型,以褪黑素(melatonin,MT)拮抗氧化损伤来探究DIDP长期经口暴露对过敏性皮炎的影响及其相关分子机制。设置7个实验组:(1)生理盐水组;(2) 200mg/kg/dDIDP组 ;(3) FITC 组;(4) FITC+2 mg/kg/d DIDP 组;(5 ) FITC+20 mg/kg/d DIDP 组;(6) FITC+200 mg/kg/d DIDP组;(7) FITC+200 mg/kg/d DIDP+MT 拮抗组。在第 1-21 天,(1) - (7)组每天用生理盐水或不同浓度DIDP对小鼠进行灌胃,同时(7)组用1 mg/mLMT对小鼠进行灌胃。在第22、23、28天用0.5% FITC进行致敏,建立过敏性皮炎模型。在第29天麻醉小鼠进行心脏取血,然后处死小鼠,取小鼠双耳测量耳肿胀和耳重差,观察小鼠耳朵组织的肿胀程度和病理学变化。然后将耳组织进行匀浆制备匀浆液用于指标检测。检测小鼠血清中的炎症因子免疫球蛋白E (immunoglobulin E,IgE)含量,耳组织中Th1型细胞因子干扰素-γ (interferon-γ,IFN-γ)和Th2型细胞因子白介素-4 (interleukin-4, IL-4)含量及肥大细胞脱颗粒情况;检测小鼠耳组织中氧化损伤水平和氧化应激相关基因的表达情况。同时检测小鼠耳组织中胸腺基质淋巴生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)表达水平,以及核转录因子κB(Nuclear transcription factor κB,NF-κB)和信号转导与转录激活因子(Signal transducer and activator of transcriptions,STATs)的活化水平。结果如下:1.200 mg/kg/d DIDP单独作用不会使小鼠表现出过敏性皮肤炎症症状,但会造成一定程度的氧化损伤。2.与对照组相比,FITC或FITC和DIDP联合作用组(1)小鼠耳朵出现明显肿胀和病理学变化。(2)小鼠血清中IgE表达水平升高,肥大细胞脱颗粒严重。耳组织中Th2型细胞因子IL-4含量明显升高,Th1型细胞因子IFN-γ含量则相对稳定,这表明0.5% FITC诱导的过敏型皮炎属于Th2型免疫反应。(3)小鼠耳组织活性氧(reactiveoxygen,ROS)含量显著升高,还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)含量显著下降,出现氧化损伤。(4) TSLP含量明显升高。(5) NF-κB磷酸化水平显著升高。(6) STAT3、STAT5和STAT6磷酸化水平显著升高。3.与FITC组相比,高浓度DIDP(200mg/kg/d)和FITC联合作用时(1)小鼠耳朵肿胀和病理学变化进一步加重。(2)小鼠血清中IgE表达水平,耳组织中Th2型细胞因子IL-4含量进一步升高,肥大细胞脱颗粒情况进一步加重。(3)小鼠耳组织ROS含量显著升高。(4) TSLP含量进一步升高。(5) STAT3、STAT5和STAT6磷酸化水平进一步升高。4.与 FITC+200 mg/kg/d DIDP 组相比,氧化损伤拮抗组(FITC+200.0 mg/kg/d DIDP+MT组)(1)小鼠的耳肿胀和病理学变化有效减轻。(2)小鼠血清中IgE表达水平,耳组织中Th2型细胞因子IL-4含量显著降低,肥大细胞脱颗粒情况减轻。(3)小鼠耳组织ROS含量明显降低,GSH水平显著升高。(4)核因子相关因子(NF-E2-related factor2,Nrf2)表达上调。同时,醌氧化还原酶-1 (Quinone oxidoreductase-1,NQO-1)和血红素加氧酶-1 (Heme oxygenase-1,HO-1)含量显著升高。(5) TSLP含量有效降低。(6) NF-κB磷酸化水平显著降低。(7) STAT3、STAT5和STAT6磷酸化水平明显降低。结论:DIDP长期经口暴露可以加重小鼠的过敏性皮炎。氧化应激可能是DIDP影响过敏性皮炎的一种重要分子机制。另外,DIDP和FITC联合作用可以激活NF-κB信号通路,进而促进TSLP的分泌。而TSLP可能通过激活STATs进一步加剧炎症效应和过敏反应。MT则通过激活Nrf2信号通路,促进抗氧化酶HO-1、NQO-1表达上调,降低氧化应激水平,减轻过敏性皮炎症状。这为DIDP的毒性研究以及过敏性疾病的防治提供了理论依据。