【摘 要】
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水曲柳（Fraxinus mandschurica Rupr.）是东北地区一类重要的用材与绿化树种,但最近这些年,频繁发生的病虫害极大制约着水曲柳林分资源,水曲柳枝枯病在东北帽儿山地区已大面积发生,导致水曲柳枝条枯死,给水曲柳资源造成极大危害。如今防治水曲柳病害多采用化学农药进行防治,但是农药的过多使用造成了环境污染和生态破坏的问题愈发严重。植物体内普遍存在内生菌,分布在植物的各个部位。植物内生菌
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水曲柳（Fraxinus mandschurica Rupr.）是东北地区一类重要的用材与绿化树种,但最近这些年,频繁发生的病虫害极大制约着水曲柳林分资源,水曲柳枝枯病在东北帽儿山地区已大面积发生,导致水曲柳枝条枯死,给水曲柳资源造成极大危害。如今防治水曲柳病害多采用化学农药进行防治,但是农药的过多使用造成了环境污染和生态破坏的问题愈发严重。植物体内普遍存在内生菌,分布在植物的各个部位。植物内生菌是植物微生物生态系统的重要组成部分,并能够作为新型生防因子,能通过合成具有抗菌功能的活性物质、诱发植株抗病性和促进植株生长等机理增强宿主植株抗病性,现已作为植物病害生物防治中潜在的生防菌而受到广泛关注。本研究从水曲柳枝枯病病枝中分离病原菌,从形态学和分子生物学水平进行鉴定,进而以分离获得的水曲柳枝枯病病原菌作为目的菌株,利用高通量技术分析水曲柳枝枯病对内生真菌多样性的影响,从健康水曲柳中鉴定、筛选具有稳定拮抗作用的内生菌。并对内生拮抗菌的培养特性进行研究优化,为利用水曲柳内生菌进行水曲柳枝枯病的生物防治提供基础理论依据。本研究主要取得了以下结果。（1）水曲柳枝枯病病原菌的分离与鉴定从经表面消毒的水曲柳枝枯病病枝样品中中分离病原真菌,共获得27个分离株,通过形态学观察分为6个菌株。回接实验结果显示,接种菌株FL1的水培枝呈现明显的枝枯病症状,且经组织分离法再次获得。分子生物学鉴定结果表明,菌株FL1为Diaporthe cotoneastri。（2）水曲柳枝枯病对内生真菌多样性的影响通过高通量测序技术,共获得了507个ASVs,感病前后的物种丰度有很大的改变,感病后内生真菌的丰富度指数（Chao1）上升,同时多样性指数（Shanno,Simpson）显著上升,表明水曲柳枝枯病改变了水曲柳内生真菌的群落结构,提高了内生真菌的丰富度和多样性。（3）内生菌的分离与鉴定从水曲柳健康枝条样品中获得了114个分离株,经形态学和分子生物学鉴定,鉴定结果显示,除了两株无法鉴定的菌株,112个分离株分属于21个属35个种,其中链格孢属（Alternaria）5种、镰刀菌属（Fusarium）5种、亚隔孢壳属（Didymella）3种、纤孔菌属（Bjerkandera）2种、枝孢霉属（Cladosporium）2种、穴壳菌属（Dothiorella）2种、微壳色单隔孢属（Microdiplodia）2种、短梗霉属（Aureobasidium）、葡萄座腔霉属（Botryosphaeria）、锥毛壳属（Coniochaeta）、盾壳霉属（Coniothyrium）、间座壳属（Diaporthe）、隔孢球壳属（Didymosphaeria）、色二孢属（Diplodia）、小光壳属（Leptosphaerulina）、小球壳孢属（Microsphaeropsis）、丛赤壳属（Nectria）、拟茎点霉属（Phomopsis）、Nothophoma、Paraconiothyrium和Phaeoacremonium。（4）内生拮抗菌的筛选采用对峙培养法筛选具有拮抗作用的内生菌,获得9株内生拮抗菌,分别是Coniothyrium pyrinum、Aureobasidium sp.、Cladosporium anthropophilum、Coniochaeta velutina、Phaeoacremonium fraxinopennsylvanicum、Fusarium sp.、Didymella sp.、Nothophoma spiraeae和Dothiorella sp.。其中Coniothyrium pyrinum和Coniochaeta velutina对病原菌的拮抗效果显著,抑菌率分别为43.55%和34.15%。（5）内生拮抗菌的培养条件优化Coniothyrium pyrinum的最佳培养条件为pH=6的PDA培养基,温度25℃,光暗交替（12L/12D）条件下培养。Coniochaeta velutina的最佳培养条件为pH自然的CMD培养基,温度27℃,光暗交替（12L/12D）条件下培养。
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