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实验目的应用巢式PCR方法检测人类多瘤病毒KIPyV和WUPyV基因，并对扩增产物进行序列分析；用RT-PCR方法检测RSV、IFV(A、B型)、PIV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型)、hRV、ADV、冠状病毒OC43、229E及hMPV、HBoV、冠状病毒NL63、HKU1，并进行序列测定，以了解兰州地区急性呼吸道感染患儿病毒感染状况。对象及方法1．收集兰州地区2006年12月到2007年11月确诊为急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物(Nasopharyngea aspirates，NPA)标本。2．用巢式PCR方法检测人类多瘤病毒KIPyV和WUPyV基因，并对扩增产物进行序列分析：用RT-PCR方法及PCR检测RSV、IFV(A、B型)、PIV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型)、hRV、ADV、冠状病毒OC43、229E、NL63、HKU1及hMPV、HBoV。3．对各种病毒在儿童急性呼吸道感染的临床特点进行分析。4．结果1．406例鼻咽抽吸物(NPA)标本检测到11例KIP_yV和17例WUP_yV阳性扩增产物，阳性检出率分别是2．7％和4．2％。将阳性PCR产物进行序列测定及分析发现与Genebank中已知序列同源性在96％-100％之间，KIPyV和WUPyV兰州株的核苷酸变异较小，但也有个别碱基的插入和突变；2．KIPyV和／或WUPyV感染病例主要是3岁以下儿童。17例WUPyV感染患儿中男性6例，女性11例，男女感染率之比1：1．8。11例KIPyV感染患儿中男性7例，女性4例，男女感染率之比1．75：1。两种病毒的检出率在性别上均无差别(X~2=0．946，P>0．05；X~2=0．781，P>0．05)；3．KI多瘤病毒感染儿童年龄最大9岁，最小3天，中位数年龄7月。3岁以内患儿占KIPyV感染患儿的73％(8／11)。WUPyV感染儿童年龄最大8岁，最小1天，中位数年龄2岁2月，3岁以内患儿占WUPyV感染患儿的65％(11／17)；4．KIPyV和WUPyV阳性病例主要分布在秋冬季，KIPyV 11月和1月检出数最多，均为3例，WUPyV11月检出数达到高峰，为9例；5．KIPyV和WUPyV感染阳性共28例，混合感染其他病毒总共20例，其中KIPyV混合其他病毒感染8例，WUPyV混合感染11例，混合感染率分别是72．7％(8／11)和64．7％(11／17)；6．临床诊断上呼吸道感染、细支气管炎、和支气管肺炎中均KIPyV和WUPyV感染；7．406例患儿总共检出病毒感染阳性病例232例，总检出率达57．1％。其中RSV感染阳性118份，阳性率为29．1％；hRV感染阳性56份；阳性率为13．8％；ADV感染阳性52份；阳性率为12．8％；PIV3感染阳性38份；阳性率为9．4％：HBOV感染阳性29份；阳性率为7．1％；hMPV感染阳性29份；阳性率为7．1％；IFVA感染阳性29份；阳性率为7．1％；Hcov-HKU1感染阳性12份；阳性率为3．0％；IFVB感染阳性6份；阳性率为1．5％；PIV1感染阳性2份；阳性率为0．5％；Hcov-229E感染阳性1份；阳性率为0．2％；未能检测到PIV2及Hcov-OC43；8．242例男性患者中病毒感染141例(58．3％)，女性164例感染91例(55．5％)，男女感染率的之比为1．05：1，没有明显差异(X~2=0．579,P>0．05)；9．患儿年龄最大14岁，最小1天。平均年龄2岁5月。1岁以内患儿病毒感染89例，占病毒感染人数的38．4％,1-3岁患儿病毒感染78例，占总感染人数的33．6％,3-5岁患儿病毒感染39例，占16．8％，大于5岁患儿病毒感染阳性26例，占11．2％；随着年龄的增长，病毒的阳性检出率逐渐下降。各年龄组的发病率之间无明显统计学意义(P>0．05)。10．本地区儿童病毒性急性呼吸道感染的季节分布较明显，以冬春季节为主。结论1．病毒病原在兰州地区儿童呼吸道感染中占有重要地位，57．1％的患儿病毒感染阳性。2．兰州地区急性呼吸道感染患儿中检测到KI和WU多瘤病毒基因。多瘤病毒KI和WU的阳性检出率分别是2．7％和4．2％。感染病例主要是3岁以下儿章，性别无明显差异。3．本地区儿童病毒性呼吸道感染以5岁以下患儿为主，2岁以下年龄组更为多见，且具有明显的季节分布特征，以冬春季节最多。4．本发地区小儿病毒性呼吸道感染病原中RSV、hRV、ADV及PIV3占有主要地位，近年新发现病毒Hmpv、HBoV亦占有一定比例。新型冠状病毒NL63和HKU1在本地区儿童呼吸道感染中首次检出。