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本文以在我国分离获得的对丽金龟科幼虫高毒力的苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis简称Bt）HBF-1为供试菌株，以其产生的杀虫晶体蛋白为检测目标，通过制备的抗Bt蛋白多克隆抗体，建立了土壤中HBF-1菌株毒蛋白含量的酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）测定方法。抗原是影响抗体特异性和效价的重要因素。为了得到高纯度的杀虫晶体蛋白，本研究采用等电点法沉淀出晶体杀虫蛋白，用聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步纯化粗提的杀虫晶体蛋白，得到分子量约为130kDa的电泳纯杀虫晶体蛋白，作为免疫用抗原。利用该抗原分四次对新西兰白兔进行免疫，获得了高特异性的抗血清，再用辛酸—硫酸铵盐析法，获得了高免血清中的免疫球蛋白IgG，SDS-PAGE电泳结果表明，提取的IgG纯度较高，其浓度达到5.6344mg／mL。采用改良的过碘酸钠法，用辣根过氧化物酶标记IgG，制备出标记率为0.28，克分子比为0.798的酶标抗体。通过利用直接法、间接法和双抗夹心法等ELISA方法检测土壤中Bt毒蛋白的含量，综合样品检测值的相关系数CV，EC50及检测率三个方面，明确双抗体夹心ELISA法均优于其它两种方法，间接ELISA法次之，从而证明双抗夹心法是一种检测土壤中Bt毒蛋白含量较适宜的方法。明确了双抗体夹心ELISA法的最佳工作条件：抗体的包被量为7μg／mL；Bt杀虫晶体蛋白的3种提取液（Tris—硼酸、Na2CO3缓冲液、PBST）中，以Na2CO3缓冲液为最佳提取液；封闭液为0.1％明胶-PBST；酶标抗体的最适工作浓度为1：800稀释；待测样品的反应时间为37℃120min；酶标抗体的时间为37℃60min；底物显色时间为室温15min。通过对该ELISA法的特异性试验、交叉性试验和重复性试验验证，证明双抗体夹心ELISA法是一种特异、敏感、快速、操作简便的方法。利用优化的双抗夹心ELISA系统检测花生田里Bt蛋白的消长动态，结果表明利用双抗夹心ELISA法定量测定土壤中Bt蛋白的量能够明确反映出土壤中Bt毒蛋白含量的动态变化情况。在播种期施入Bt毒蛋白，原液及2倍稀释液土深20cm的处理在3d时达到最大含量，随后为平缓下降的趋势；原液和2倍稀释液土深2cm的处理在3d时蛋白含量上升，随后下降，在21d时检测量达到最高峰，随后下降至134d检测结束，在此过程中3～14d深土层20cm的蛋白含量明显高于浅土层2cm，随后除2倍稀释液21d、31d时有所例外，其余各处理均为深土层蛋白量高于浅土层。在开花前期施入Bt毒蛋白，四处理的蛋白含量3d达到最高，随后原液和2倍稀释液土深20cm的处理急剧下降，原液和2倍稀释液土深2cm的处理下降平缓。在开花后期施入Bt毒蛋白，四处理蛋白含量3～7d达到最高，随后呈平缓下降的趋势。因此，在不同施药时期，各处理深土层20cm的Bt蛋白量高于浅土层2cm。总之，在花生开花前期和开花后期进行灌根施药，土壤中Bt蛋白表达高峰期即为铜绿丽金龟（Anomala corpulenta Motschulsky）卵高峰期和幼虫一龄期、二龄初期，能够对金龟子幼虫达到最佳防治效果。