研究目的在人类辅助生殖技术中,如何提高胚胎种植率及活产率是现代医学急需解决的问题,而子宫内膜容受性是影响胚胎种植成败的最主要的因素之一。其中,子宫内膜厚度是评估子宫内膜容受性的重要指标之一。薄型子宫是指子宫内膜的厚度过薄,且低于能获得妊娠的最小厚度。薄型子宫内膜不仅预示着较低的妊娠率,也与不良妊娠结局相关,如流产,胎盘异常等。薄型子宫内膜患者经历着反复移植失败带来的巨大的精神压力和经济压力。现代医学探索了多种方法来改善薄型子宫内膜以增加活产机会,如应用外源性雌激素,改善内膜血流灌注,内膜骚刮,以及宫腔内灌注粒细胞集落刺激因子等方法。其中宫腔内灌注干细胞成为备受关注的新型疗法。人脐带间充质干细胞又因其免疫原性低,易获取等特点,成为治疗薄型子宫内膜的新选择。本研究以大鼠作为动物模型,探究人脐带间充质干细胞对大鼠损伤后薄型子宫内膜的修复作用,为探究薄型子宫内膜的治疗提供新思路。研究方法本实验将SD大鼠分为假手术组,模型组及干细胞治疗组,通过大鼠宫腔内灌注95%乙醇,造成大鼠子宫薄型子宫内膜的模型,1个动情周期后,通过宫腔内灌注人脐带间充质干细胞对大鼠进行治疗。术后通过苏木素—伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）,观察分析三组大鼠子宫内膜形态、厚度、腺体个数;通过Masson染色观察术后子宫内膜纤维化程度;通过western blot方法以及免疫组织化学、免疫荧光检测细胞角蛋白、波形蛋白、以及血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,Lif）的表达、分析子宫内膜功能及容受性。结果本实验中,我们通过观察离体大鼠子宫发现:大鼠子宫内灌注95%乙醇显著损伤子宫组织,人脐带间充质干细胞能显著改善95%乙醇灌注造成的损伤;通过HE染色发现,模型组大鼠子宫内膜厚度（281.99±51.12μ m）及腺体个数（2.67±1.07个）较假手术组（605.60±14.85 μ m;5.83±0.75个）均减少,人脐带间充质干细胞能显著改善子宫内酒精灌注造成的子宫内膜损伤,增加子宫内膜厚度（389.69±27.94 μm）及腺体数量（4.50±1.04个）。通过Masson染色,我们观察到大鼠子宫内灌注酒精增加子宫内膜的纤维化,人脐带间充质干细胞能显著改善子宫内酒精灌注造成的子宫内膜纤维化程度。三组大鼠子宫内膜纤维化面积所占比例分别为:假手术组:18.17±2.35%;模型组:37.95±3.44%;干细胞治疗组:21.98±4.308%。通过western blot及免疫组化染色以及免疫荧光染色结果,我们观察到,子宫内酒精灌注会显著减少子宫内膜细胞角蛋白和波形蛋白的表达水平,损伤子宫内膜上皮细胞和基质细胞;而干细胞可以改善这种损伤;三组大鼠单位面积子宫内膜角蛋白所占的比例分别为:假手术组:31.62±5.65%;模型组:15.99±3.64%;干细胞治疗组:26.15±1.63%。三组大鼠单位面积子宫内膜波形蛋白所占的比例分别为:假手术组:38.63±2.95%;模型组:17.84±1.95%;干细胞治疗组:22.93± 1.31%。子宫内酒精灌注会显著减少子宫内膜VEGF和Lif的表达水平,而干细胞可以显著增加VEGF和Lif在酒精诱导的薄型子宫内膜中的表达。三组大鼠单位面积子宫内膜VEGF所占的比例分别为:假手术组:33.13±1.30%;模型组:15.67±1.67%;干细胞治疗组:26.12±5.11%。三组大鼠单位面积子宫内膜LIF所占的比例分别为:假手术组:33.13±1.30%;模型组:15.67±1.67%;干细胞治疗组:26.12±5.11%。结论1.通过大鼠宫腔内灌注乙醇,可以造成大鼠薄型子宫内膜模型,其主要表现是:HE染色下,大鼠子宫内膜厚度明显减少,腺体数量明显减少。子宫内膜的完整性被破坏,细胞形态发生变化。血管数量减少。间质细胞,上皮细胞数量减少,VEGF的表达减少,形成新生血管的能力降低,LIF的表达减少,子宫内膜接受胚胎的能力降低,子宫内膜容受性降低。2.通过干细胞直接宫腔内灌注的方法,对损伤的大鼠子宫内膜有一定的修复作用。主要表现为增加大鼠的子宫内膜厚度,腺体数量。以及促进新生血管的形成,促进间质细胞,上皮细胞的再生。3.宫腔内灌注脐带间充质干细胞,可以促进大鼠损伤子宫内膜功能的恢复。主要表现为:VEGF的表达升高,子宫内膜形成新生血管的能力增加。LIF的表达增加,子宫内膜容受性增加。