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目的: 构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)重组Bb-OprI疫苗，研究其免疫小鼠后诱导的保护力和免疫机制。 方法: PCR扩增OprI抗原编码基因并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-lλT，构建重组质粒pGEX-Oprl。将pGEX-Oprl电穿孔转化大肠埃希菌BL21(DE3)，SDS-PAGE和Western blot分析并鉴定表达产物。将重组质粒电穿孔转化两歧双歧杆菌iBifidobacterium bifidum, Bb), SDS-PAGE和Western blot分析并鉴定表达产物。将重组Bb-OprI疫苗灌胃接种小鼠，以PA01株进行攻击。分离肺脏和脾脏，检测肺组织的细菌负荷，ELISA检测血清抗体，MTT法检测脾细胞增殖，流式细胞术验证该疫苗对脾T淋巴细胞亚群分化和脾细胞凋亡的影响，PCR分析脾细胞因子和Treg变化。 结果: 成功扩增出194bp的OprI基因，双酶切和PCR鉴定证实OprI基因成功克隆入pGEX-1λT中，并且pGEX-Oprl成功转化BL21(DE3)，BL21(pGEX-0prI)可表达Mr约32kDa的GST-OprI蛋白，Pa感染的鼠血清可识别该蛋白。pGEX-Oprl成功转化Bb，Bb-OprI疫苗可表达Mr约32kDa的GST-OprI蛋白，该蛋白能被Pa感染的鼠血清识别。Bb-OprI疫苗接种及PA01株攻击BALB/c鼠后，Bb-OprI组肺部的细菌负荷降低，疫苗组的血清抗体IgG、IgG2b、IgG3和IgE水平升髙，脾细胞增殖和CD4+T细胞比例增加，脾细胞凋亡减少，疫苗组小鼠脾细胞可扩增出IL-2、IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10、IL-17和Foxp3基因，两对照组PCR扩增均阴性。 结论: 成功构建了重组Bb-OprI疫苗，重组Bb-OprI疫苗可诱导BALB/c小鼠产生体液免疫、细胞免疫和免疫调节作用，从而抵抗Pa的感染并维持免疫稳态。