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目的:肿瘤在全球死亡病例中排名第二。在中国,肿瘤是导致死亡的主要原因,中国肿瘤发病率及死亡率约占全球肿瘤发病的四分之一,其中肝癌的发病率及死亡率约占全球肿瘤发病的二分之一。肝癌中最重要的类型是肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinogenesis,HCC）,也是最常见的实体肿瘤,约占原发性肝癌的90%。尽管在HCC的检测和治疗方面取得了进展,但大多数HCC患者预后极差。目前缺乏针对HCC的特效治疗方案,主要以外科手术为主,放疗及化疗等治疗为辅,但并不能彻底治愈,且手术重创及化疗后导致的毒副作用,使病人生存质量变差。因此,寻找有效治愈肝癌的方法成为医学界的重点和难点。近年来,祖国传统医学及中医药在治疗肿瘤的过程中发挥其独特优势,在化疗的同时联合中药治疗已成为目前研究的热点。黄芪（Astragalus membranaceus,AM）具有补气、散瘀之功效。现代药理研究证明AM的主要药效成分黄芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）能够增强一些肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用并且具有抗肿瘤的功效。越来越多的研究报道显示APS可以抑制乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肺癌等恶性肿瘤细胞的生长,但APS对人肝癌细胞SMMC-7721、Huh-7增殖及分化的影响,未见报道。本实验通过检测人肝癌细胞SMMC-7721、Huh-7增殖相关基因、干性相关基因及其分化相关基因的表达变化,旨在初步探讨APS在肝癌治疗中的作用及可行性。方法:1.细胞的培养:SMMC-7721细胞和Huh-7细胞用含1%非必需氨基酸和10%新生牛血清的DMEM（高糖）培养基复苏传代后,接种于100 ml培养瓶,在37℃、5%CO2培养箱中培养。2.确定APS的浓度:采用CCK-8（Cell Count Kit-8）实验,将APS分为0 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L,接种细胞于96孔板并放入37℃、5%CO2培养箱中培养24 h、48 h及72 h后,在每孔加入10μL的CCK-8试剂,轻轻混匀,并将培养板置于37℃、5%CO2培养箱中培养4 h。放入酶标仪计算OD值确定出APS的浓度与时间点。3.SMMC-7721细胞中PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6基因转录水平的检测Trizol一步法提取SMMC-7721细胞中总RNA;用GAPDH做内参,Real-time PCR方法检测PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6的mRNA表达。4.SMMC-7721细胞中PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6蛋白含量的检测RIPA裂解法提取SMMC-7721细胞总蛋白后,Lowry法测定蛋白含量,Western-blotting检测SMMC-7721细胞中PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6蛋白含量。5.Huh-7细胞中PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6基因转录水平的检测Trizol一步法提取Huh-7细胞中总RNA;用GAPDH做内参,Real-time PCR方法检测PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6的mRNA表达。6.Huh-7细胞中PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6蛋白含量的检测RIPA裂解法提取Huh-7细胞总蛋白后,Lowry法测定蛋白含量,Western-blotting检测Huh-7细胞中PCNA和c-Myc及CD133和EpCAM以及HNF4α和HNF-6蛋白含量。结果:1.确定黄芪多糖的浓度通过CCK-8实验,计算细胞增殖率,最终确定APS的实验浓度为200mg/L,时间点为48 h。2.APS可以抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进其分化。2.1 APS对人肝癌细胞SMMC-7721中PCNA及c-Myc的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响Real-time PCR结果显示,PCNA及c-Myc的mRNA表达水平与对照组相比均显著降低（P<0.05）,Western-blotting结果显示,PCNA及c-Myc的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本趋于一致。2.2 APS对人肝癌细胞SMMC-7721中CD133及EpCAM的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响Real-time PCR结果显示,CD133及EpCAM的mRNA表达水平与对照组相比均显著降低（P<0.01）,Western-blotting结果显示,CD133及EpCAM的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本趋于一致。2.3 APS对人肝癌细胞SMMC-7721中HNF4α及HNF-6的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响Real-time PCR结果显示,HNF4α及HNF-6的mRNA表达水平与对照组相比均显著升高（P<0.01）,Western-blotting结果显示,HNF4α及HNF-6的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本趋于一致。3.APS可以抑制人肝癌细胞Huh-7的增殖并促进其分化。3.1 APS对人肝癌细胞Huh-7中PCNA及c-Myc的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响Real-time PCR结果显示,PCNA及c-Myc的mRNA表达水平与对照组相比均显著降低（P<0.01）,Western-blotting结果显示,PCNA及c-Myc的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本趋于一致。3.2 APS对人肝癌细胞Huh-7中CD133及EpCAM的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响Real-time PCR结果显示,CD133及EpCAM的mRNA表达水平与对照组相比均降低（P<0.05）,Western-blotting结果显示,CD133及EpCAM的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本趋于一致。3.3 APS对人肝癌细胞Huh-7中HNF4α及HNF-6的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响Real-time PCR结果显示,HNF4α及HNF-6的mRNA表达水平与对照组相比均显著升高（P<0.01）,Western-blotting结果显示,HNF4α及HNF-6的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本趋于一致。结论:1.APS呈浓度依赖性抑制人肝癌细胞SMMC-7721和Huh-7的增殖活性。2.APS能抑制人肝癌细胞SMMC-7721及Huh7的增殖相关基因及干性相关基因的表达。3.APS能促进人肝癌细胞SMMC-7721及Huh7的分化相关基因的表达。