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近十几年来,畜禽传染病及人兽共患病暴发、流行频繁,不仅给畜牧业造成重大损失,而且威胁人们的健康和公共安全。这些疾病中有许多是通过空气传播的,此类疾病的有效控制离不开传播途径的研究,例如动物舍微生物气溶胶的来源、舍内含量及舍外传播距离等,值得深入研究探讨。迄今为止,国内外尚无对动物微生物气溶胶传播模式的研究。本研究检测了鸡、兔舍内、外环境中气载需氧菌及大肠杆菌的浓度,采用ERIC-PCR技术对舍内粪便、饲料及舍内外空气样品中分离到的大肠杆菌菌株进行了同源性鉴定,同时对大肠杆菌的耐药性进行检测,以确认舍内气载大肠杆菌的来源,评估其传播距离。本研究分为四个部分:1、鸡、兔舍内、外环境中气载需氧菌及气载大肠杆菌的检测采用Andersen-6级撞击式和RCS(Reuter-Centrifugal sampler)离心式空气微生物采样器分别在4个工作日对泰安市一兔场舍内及舍外下风向10、50、100、200 m,莱芜市一种鸡场舍内及舍外下风向10、50、100、200、400、600、800 m空气中的需氧菌总数及大肠杆菌浓度进行测量,同时测量上风向100 m空气中的菌群浓度作为对照。结果显示,兔舍内气载需氧菌总数为6.1×10~3～2.0×10~4 CFU/m~3,大肠杆菌为3.5×10~2～4.9×10~2 CFU/m~3。舍外下风向10～200 m气载需氧菌总数为2.9×10~2～7.1×10~3CFU/m~3,大肠杆菌为2.5×10～7.4×10 CFU/m~3。舍外上风向100 m处气载需氧菌总数为2.4×10~2～5.0×10~2 CFU/m~3,未检测到大肠杆菌。统计分析结果显示,舍内气载需氧菌总数明显高于舍外下风向,与10 m相比差异显著(P<0.05),与50、100、200 m相比差异极显著(P<0.01);舍内气载大肠杆菌浓度与舍外下风向10、50、100、200 m相比差异极显著(P<0.01);舍外上风向100 m需氧菌总数与舍内及下风向10、50、100、200 m相比差异极显著(P<0.01);下风向10、50 m之间气载菌群浓度差异极显著(P<0.01);50、100、200 m气载菌群浓度虽然呈现依次递减的态势,但统计分析结果显示差异不显著(P>0.05)。鸡舍内气载需氧菌总数为9.7×10~4～4.9×10~5 CFU/m~3,大肠杆菌为9.5×10~2～1.3×10~3CFU/m~3。舍外下风向10～800 m气载需氧菌总数为5.8×10~2～4.1×10~4 CFU/m~3,大肠杆菌为0～4.2×10~2 CFU/m~3,其中400、800 m分别分离到1株大肠杆菌,600 m处未分离到大肠杆菌。舍外上风向100 m处气载需氧菌总数为8.0×10~2～1.1×10~3 CFU/m~3,仅分离到1株大肠杆菌。舍内气载需氧菌总数明显高于舍外下风向10、50、100、200、400、600、800 m的菌群浓度,统计结果显示差异极显著(P<0.01);舍内气载大肠杆菌浓度与舍外下风向10、50、100、200 m相比差异极显著(P<0.01);舍外上风向100 m菌群浓度与舍内及下风向10、50、100、200 m相比差异极显著(P<0.01),与400、600、800 m比较差异不显著(p>0.05);下风向10 m与50 m相比差异极显著(P<0.01),50 m与100 m相比差异显著(P<0.05),100 m与200 m相比差异不显著(p>0.05);下风向400 m与10、50、100、200 m气载菌群浓度差异极显著(P<0.01),但与600、800 m相比较差异不显著(P>0.05)。2、鸡、兔舍耐药性大肠杆菌气溶胶向环境扩散的研究采用同一工作日由兔舍/鸡舍内外空气中分离到的大肠杆菌菌株,每个取样点取20株,选择氟哌酸(NOR)、头孢哌酮(CFP)、氯霉素(CMP)、复合磺胺(SXT)、庆大霉素(GEN)、链霉素(STR)、四环素(TET)、利福平(RIF)、红霉素(ERY)、青霉素(P-G)、妥布霉素(TOB)、呋喃妥因(Ni)等药敏纸片,进行耐药性测定。结果显示,兔舍内外空气中分离到的菌株都对RIF、P-G耐药,鸡舍内外空气中分离到的菌株对RIF、ERY、P-G均耐药。这在一定程度上可以证明舍内微生物气溶胶包括耐药细菌可随气体交换传播到周围环境中,使其周围环境受到微生物污染。3、ERIC-PCR技术对鸡、兔舍气载大肠杆菌及其在环境中的扩散的研究应用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链式反应技术(ERIC-PCR)对兔场和种鸡场舍内及其舍外环境空气中在4个工作日分离到的96株大肠杆菌基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后得到指纹图谱并进行分析。结果显示,不同取样时间在同一场舍内空气中分离到的大肠杆菌具有相同的图谱,且舍内与舍外环境顺风方向空气中的大肠杆菌具有相同的图谱;不同的场分离到的大肠杆菌指纹图谱具有多态性。表明,畜禽舍内气载大肠杆菌可随空气传播到舍外环境中,使舍外环境在一定范围内受到动物源性生物污染。4、鸡、兔舍内气载大肠杆菌来源的研究本实验对鸡、兔舍舍内粪便、舍内食槽中的饲料及仓库内的饲料的需氧菌总数和大肠杆菌含量进行了测定,对分离到的大肠杆菌进行了耐药性检测和ERIC-PCR,并将检测结果与舍内气载需氧菌和大肠杆菌的分析结果进行了比较。结果显示,舍内食槽中饲料的需氧菌总数与仓库中饲料需氧菌总数相比差异极显著(P<0.01),与舍内气载需氧菌总数相比差异极显著(P<0.01);舍内饲料中的大肠杆菌浓度与舍内气载大肠杆菌浓度相比差异极显著(P<0.01);粪便需氧菌总数与舍内气载需氧菌总数相比差异极显著(P<0.01);粪便大肠杆菌浓度与气载大肠杆菌浓度相比差异极显著(P<0.01)。兔舍舍内气载大肠杆菌及粪便、饲料中分离到的大肠杆菌都对RIF、P-G和ERY耐药,对GEN、TOB和Ni敏感;鸡舍舍内气载大肠杆菌及粪便、饲料中分离到的大肠杆菌对ERY、P-G均耐药,对TOB、Ni均敏感。舍内粪便、饲料中的大肠杆菌具有与气载大肠杆菌相似的ERIC-PCR指纹图谱。说明舍内微生物气溶胶沉降到了食槽中的饲料表面,使饲料被污染;畜禽舍内空气中的耐药大肠杆菌来自舍内饲养的畜禽的粪便。