石墨烯及其衍生材料对雪旺细胞的调控作用探讨

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周围神经损伤(peripheral nerve injury,PNI)是常见的临床病症,目前PNI修复的临床技术仍然有限,迫切需要新的修复方案及技术。以生物材料、种子细胞和外界刺激为主的神经组织工程技术表现出良好的应用前景。雪旺细胞是周围神经系统内重要的一类胶质细胞,PNI损伤后行使一系列促进神经再生的功能。神经系统具有电本性及取向性结构,因此研究电刺激(electrical stimulation,ES)及调控支架形貌对雪旺细胞行为的调控作用具有重要意义。本论文中基于石墨烯及其衍生材料独特的物理化学性能,制备了含石墨烯(及其衍生材料)的复合材料。将RSC-96雪旺细胞作为研究对象,研究ES和支架材料理化性能对RSC-96雪旺细胞行为的影响,为PNI修复提供理论依据。主要研究结果如下:1、利用溶液浇筑法制备了掺杂不同浓度石墨烯的热塑性聚氨酯薄膜。随石墨烯含量的增加,薄膜导电和力学性能先增加后回落。石墨烯浓度为4 wt%时,薄膜导电率可达33.45±5.357 S/m。体外生物学评价中,薄膜的溶血率均低于5%。10 m V直流电刺激可有效促进RSC-96细胞的增殖和生长,且过高的ES电压条件对雪旺细胞的生长有抑制作用。2、利用HUMMER法制备氧化石墨烯(graphene oxide,GO),采用真空辅助抽滤技术将其涂覆于取向的纤维膜。研究了涂覆工艺对支架形貌特征及理化性能的影响。GO负载后纤维膜表面亲水性显著提高,机械性能增强约30%。GO浓度为0.35 wt%时,纤维膜表面取向特征较完整保留。体外试验表明,高度取向的纤维特征引导RSC-96细胞的呈伸长铺展,GO的存在对RSC-96细胞生长增殖无显著影响。3、通过抗坏血酸还原GO得到还原氧化石墨烯产物(reduced graphene oxide,r GO),结合上节中静电纺丝技术制备的取向型纤维膜,对其表面进行r GO的电活性功能化涂覆,并研究ES与取向特征对RSC-96细胞多种行为的协同调控作用。纤维膜的亲水性、导电性能和机械性能随着r GO负载有一定程度增强。r GO浓度为0.1 wt%时,纤维膜导电率为0.105 S/m,且取向特征较好保留。在10 m V电刺激作用下,纤维取向和ES的协同作用有效增强了RSC-96细胞的迁移、增殖和神经生长因子表达,且细胞均匀铺展高度有序。本论文的新颖之处在于:(1)基于石墨烯制备了导电性能优越的取向神经工程支架,并探讨ES对雪旺细胞生长行为的影响;(2)利用简易的物理加工工艺,实现了纤维膜表面功能化并有效保留纤维膜的取向特征;(3)研究支架的形貌特征与ES对雪旺细胞行为的协同影响,表明ES和取向结构的协同作用有效地促进了雪旺细胞迁移、增殖及神经生长因子的分泌等行为。上述研究为PNI修复治疗技术的研发提供了有力的支撑。
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