论文部分内容阅读
目的：胃癌多药耐药(multidrug resistance，MDR)的客观存在是肿瘤化疗失败的主要原因，侵袭转移是胃癌患者死亡的又一主要原因，两者是治疗过程中的两大难点，且这两方面相互交织，共同作用导致肿瘤演进。目前常用化疗药物的效果由于肿瘤细胞MDR及高侵袭性的存在远不能令人满意。因此，寻找低毒高效的药物已是肿瘤化疗药物领域研究的热点。近年来，许多研究者把MDR逆转剂以及抑制肿瘤细胞转移的研究转向低毒的中药，已从多种中药中发现了具有逆转肿瘤MDR及抑制肿瘤侵袭的活性成分。粉防己碱(Tetrandrine，TET)是防己科植物粉防己的主要活性成分，具有明显的逆转肿瘤耐药的作用。锌指蛋白作为转录调控因子，对MDR、肿瘤侵袭能力发挥重要调节作用。本研究观察TET作用于人亲本胃癌细胞SGC7901与胃癌耐药细胞SGC7901/ADR后，两种细胞中锌指蛋白139(ZNF139)、MRP1、MMP7 mRNA的变化，探讨其与胃癌多药耐药、侵袭转移关系。 方法：应用细胞培养技术培养人亲本胃癌细胞株SGC7901和人耐阿霉素胃癌细胞株SGC7901/ADR，通过RT-PCR法检测SGC7901及SGC7901/ADR两种细胞内ZNF139、MRP1、MMP7 mRNA表达情况，应用不同浓度(0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml)粉防己碱药物对两种细胞培养48h后，通过RT-PCR法检测SGC7901及SGC7901/ADR两种细胞内ZNF139、MRP1、MMP7 mRNA表达情况。 结果： 1.ZNF139、MRP1、MMP7在SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞中的表达情况： 在SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞中ZNF139、MRP1、MMP7mRNA均有表达，且在胃癌耐药细胞SGC7901/ADR中ZNF139、MRP1、MMP7 mRNA表达均较SGC7901细胞有显著升高(P<0.05)。 2.粉防己碱MTT实验结果： 粉防己碱无毒剂量MTT结果显示，粉防己碱终浓度分别0.5μ g/ml、1.0μ g/ml、1.5μ g/ml、2.0μ g/ml、2.5μ g/ml，对SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞无明显细胞毒作用。 3.粉防己碱对SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞中ZNF139 mRNA表达的影响： 不同浓度的粉防己碱作用于SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞48h，随粉防己碱浓度的增高，两种细胞中ZNF139 mRNA表达量逐渐降低。在耐药细胞中以浓度为0.5μ g/ml处理后ZNF139 mRNA表达降低与对照组比较无明显差别(P>0.05)，其余浓度处理与对照组比较均有明显差别(P<0.05)。 4.粉防己碱对SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞中MRP1 mRNA表达的影响： 不同浓度的粉防己碱作用于SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞48h，随粉防己碱浓度的增高，两种细胞中MRP1 mRNA表达量逐渐降低。在耐药细胞中以浓度为0.5μ g/ml、1.0μ g/ml处理后MRP1 mRNA表达降低与对照组比较无明显差别(P>0.05)，其余浓度处理与对照组比较均有明显差别(P<0.05)。 5.粉防己碱对SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞中MMP7 mRNA表达的影响： 不同浓度的粉防己碱作用于SGC7901、SGC7901/ADR两种细胞48h，随粉防己碱浓度的增高，两种细胞中MMP7 mRNA表达量逐渐降低。在耐药细胞中以各浓度处理后MRP1 mRNA表达降低与对照组均有明显差别(P<0.05)。 6.ZNF139、MRP1及MMP7在SGC7901/ADR细胞中表达的相关性 在耐药细胞SGC7901/ADR中，ZNF139与MRP1、MMP7的表达分别呈正相关(r=0.65，P<0.05；r=0.52，P<0.05)；MRP1与MMP7的表达亦呈正相关(r=0.69；P<0.05)。 结论： 1.ZNF139、MRP1在耐药细胞SGC7901/ADR中表达显著高于亲本SGC7901细胞，提示ZNF139、MRP1可能与胃癌细胞获得性耐药相关。 2.MMP7 mRNA在耐药细胞SGC7901/ADR中表达显著高于亲本SGC7901细胞，提示耐药细胞可能具有更高的侵袭能力。 3.粉防己碱具有下调ZNF139、MRP1、MMP7 mRNA表达的作用，且随不同浓度粉防己碱作用后，其表达程度降低，表明粉防己碱可能具有逆转胃癌多药耐药及抑制肿瘤侵袭的作用。 4.ZNF139可能是调节MRP1、MMP7的共同机制，粉防己碱可能是通过下调ZNF139的表达，从而逆转胃癌细胞耐药并降低胃癌的浸润转移。