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本实验利用腺病毒载体介导外源性基因葡萄糖转运体3(Glucosetransporter3,GLUT3)转染大鼠PC12细胞探讨缺氧—再灌注氧损伤时Ad-GLUT3对PC12细胞的保护情况及抗凋亡机制。
研究方法和结果:在HEK—293细胞内大量扩增腺病毒,浓缩,纯化并转染大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)证明它具有感染活性和表达活性。携带绿色荧光蛋白(greenfluoresecentprotein,GFP)的重组腺病毒Ad-GFP感染大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)的实验表明,腺病毒对PC12细胞有较高的转染率,而且毒性较低。在建立大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)缺氧—再灌注氧损伤模型的基础上,使用Ad-GLUT3转染PC12细胞,流式细胞仪法和TUNEL法进行凋亡分析显示,Ad-GLUT3转染组的凋亡率较对照组明显降低(P<0.05),使用同位素放射的方式分析葡萄糖代谢情况,Ad-GLUT3转染组的葡萄糖吸收率较对照组明显提高(P<0.05)。本实验也使用Western-Blot方法进行了细胞凋亡相关蛋白的检测,结果显示Ad-GLUT3转染组较对照组,缺氧诱导因子-1a(hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1a)和核因子N-κB(nuclearfactor,NF-κB)明显降低(P<0.05),Bcl-2表达明显提高(P<0.05)。
研究结论:以上结果说明,Ad-GLUT3转染PC12细胞可以有效的提高PC12细胞的能量代谢,抑制细胞凋亡,为临床应用提供了重要的理论基础。