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前言 血小板生成素（thrombopoietin，TPO），又称为巨核细胞生长衍生因子（megakaryocyte growth and development factor，MGDF），是细胞因子受体超家族中的一员—c-mpl的配体。1958年，人们提出体液中存在调控血小板造血的因子，但鉴定该因子的努力一直没有获得成功。1994年，De Sauvage等采用亲和层析法首先纯化了猪的c-mpl配体，克隆了人的c-mpl配体的c-DNA。它就是人们一直探求的血小板生成素（TPO）。此后国内外对其分离、结构、生物学活性及在临床疾病中的意义进行了大量的研究，表明了血小板生成素水平检测有助于判断血小板减少的原因，指导治疗，估计预后。人类TPO基因存在于第3号染色体的3q26-27上，全长约62000。人TPO为低分子量糖蛋白，分子量为60-70Kda，由333个氨基酸组成，它的第153、154位点的精氨酸-精氨酸序列又可被蛋白酶水解形成N端和C端两个结构阈。N端结构阈高度保守，具有疏水性，可能是与其受体c-mpl结合的功能区。C端结构阈高度糖基化，似乎起稳定循环TPO的作用。它可能涉及到造血细胞（表达相应的受体）归巢或整合到骨髓微环境中。研究表明，超过90％的基质细胞培养中普遍存在TPO mRNA的表达，骨髓基质细胞培养中TPO浓度平均为37pg／ml。基质细胞分泌的TPO也许与骨髓微环境中造血干细胞的自我更新和巨核细胞造血的调控有关。TPO通过靶细胞膜上特异性受体c-mpl介导的胞吞作用被靶细胞摄取，由于TPO的氨基酸序列存在着数个蛋白酶水解位点，其中包含凝血酶的水解位点，在靶细胞内凝血酶的作用下，TPO可被降解成为无完整生物学活性的多肽片断。 本研究选取25例再生障碍性贫血（AA）患者和50例急性白血病（AL）患者（其中化疗前后各25例）作为病例组，以15例健康献血员作为正常对照组，采用放射免疫竞争法测定其血清TPO浓度，以探讨其临床意义。 实验材料 一、药品与试剂：血小板生成素放免试剂盒（北京华英生物技术研究所生产） 二、实验仪器：KDC-2046低温大容量离心机GC一2016，一放射免疫计数器LD吟一2低速离心机4℃冰箱实验方法 选取再生障碍性贫血（AA）和急性白血病（AL）患者作为病例组，其中AA患者25人，AL患者化疗前及化疗后各25例，化疗前组为初诊患者，化疗后指化疗后骨髓抑制期的患者。血清TPO的测定采用放射免疫竞争法，放免试剂盒购自北京华英生物技术研究所，按说明书进行操作，用，一放射免疫计数器测定cPm值，读取TPO浓度。实验结果 正常对照组的血清仰O浓度为84.23士14.90p岁时，AA患者组血清TPO浓度为1864.63士356.66p留而，明显高于正常对照组（P<0.01）;AL（包括化疗前及化疗后）患者组血清TPO浓度为589 .02*404.16p岁nil，高于正常对照组（P<0.01）;其中化疗前血清TPO浓度为233.50土57.89p岁nil，高于正常对照组（P<0.01）;化疗后血清TPO浓度为944.55士258.48Pg/nil，明显高于正常对照组（P<0. 01）;而且化疗后亦明显高于化疗前（P<0.01）。AA组患者血清TPO浓度明显高于AL组（P<0.01）。相关分析表明，AA患者血清TPO浓度与血小板计数呈负相关（，二一0.994，P<。.01）。AL患者（化疗前）血清TPO浓度与血小板计数呈负相关（，二一0.%1，P<0 .01）。AL患者（化疗后）血清TPO浓度亦与血小板计数呈负相关（，二一0.979，P<0.01）。AA患者血清TPO浓度与骨髓巨核细胞数呈负相关（，二一。.844P<0.01）。AL患者（化疗前）血清TPO浓度与骨髓巨核细胞数呈负相关（万二一0.931P<0.01）。讨论 体内外实验表明，TPO是对骨髓巨核细胞生长和血小板生成具有调节作用的必需的细胞因子。Sung等发现，人TPO主要由肝细胞、肾近曲小管和远曲小管及骨髓基质细胞合成，而红系和髓系祖细胞、巨核细胞及巨嗜细胞则不合成TPO。研究表明，超过90%的基质细胞培养中普遍存在TPOmRNA的表达。TPO产生后释放入血，在循环中保持一定的浓度。目前对于TPO的调控机制尚未完全阐明。Naoakilc等比较特发性血小板减少性紫瘫（I，rP）与无巨核细胞性血小板减少性紫瘫的血清TPO水平，发现I开骨髓巨核细胞数量正常或增多而其血清即0浓度显著升高。基于上述现象，他们认为形成血小板的前体一巨核细胞参与了血清，rPO水平的调节。TPO基因表达速率是稳定的，血清TPO水平的调节依赖于血小板膜上的TPO特异性受体c一mpl对TPO的摄取及降解过程。当血小板数在高水平时，TPO摄取及降解增加，其血清浓度下降，抑制巨核细胞的增殖、分化、和成熟，减少血小板的生成，使血小板水平下降;当血小板水平下降以后，TPO的摄取和降解减少，从而恢复稳定的水平，反之亦然。由此可见，循环中血小板数量可调控血清TPO水平。血小板数目增多可抑制开Q的基因转录或降低其转录的稳定性，这种作用可能通过血小板分泌的蛋白质来进行，但尚不清楚是何种蛋白质调控TPO的转录。McCarty等发现，血小板减少的实验动物骨髓和脾脏，rPO的转录明显增高。开0的基因水平调控可能与其他的造血生长因子相似，存在调控转录效率的特异性转录因子。许多文献报道，TPO水平与年龄及性别无关。 本文研究结果表明，AA患者血清即0浓度显著增高，且与血小板计数及