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目的:蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞增殖和分化、信号的转导和加工等方面起重要作用.CK2在多种白血病细胞中活性比相应的正常组织高2~8倍,且CK2的变化与肿瘤的生长情况相关.为研究其在白血病细胞中的作用机制,该研究拟利用酵母双杂交系统从自构建的HL-60细胞cDNA文库中筛选与蛋白激酶CK2 α亚基相互作用的蛋白.方法:从体外培养的HL-60细胞中提取总RNA.利用经修饰的CDS Ⅲ Oligo(dT)作为引物合成cDNA第一链,当MMLV-RT达模板的5末端时,利用该酶的末端转移酶活性,添加少量碱基(主要为C)到cDNA的3末端.在反应体系中加入SMART Ⅲ Oligo(其3端含有Oligo(G)序列,可与cDNA第一链中的Oligo(C)发生碱基配对,产生延伸的模板)作为cDNA第二链合成的引物,进行艮距离(LD)-PCR合成两端含CDS Ⅲ及SMART ⅢTM序列的双链cDNA,后者经CLONTECH CHROMA SPIN+TE-4000柱纯化后,与被酶Sma Ⅰ线性化的质粒pGADT7-Rec和本室已成功构建的BD质粒共转染感受态酵母菌AH109,其中文库cDNA与两端同样具有CDS Ⅲ及SMART ⅢTM序列的线性质粒pGADT7-Rec可在酵母细胞中利用其具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环形的有复制活性的文库质粒,此文库质粒即为酵母双杂交中的AD质粒.结果:经过酵母双杂交实验,筛选出5种与蛋白激酶CK2 α相互作用蛋白,核酸序列分析及同源性检索结果为:①插入片段约为1441 bp,其1~1 427 bp与人二磷酸果糖醛缩酶A-转录变异体2 cDNA 67~1490 bp有99.0％同源.②插入片段约为560 bp,其4~542 bp与人泛素/核糖体蛋白S27a cDNA 1~540 bp有99.6％同源.③插入片段约为474 bp,其5~461 bp与人血小板-白细胞C激酶底物(pleckstrin)cDNA 13~469 bp有99.0％同源性.④插入片段约为842 bp,其4~819 bp与人KIAA1641蛋白cDNA 1360~2 176 bp有99.0％同源性.⑤插入片段约为348 bp,其33~340 bp与人A激酶锚定蛋白转录变异体3 cDNA 24~330 bp有99.0％同源性.结论:用酵母双杂交系统从HL-60细胞中筛选出5种与人蛋白激酶CK2 α相互作用的蛋白.