【摘 要】
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板栗疫病菌与低毒病毒系统是研究宿主与病毒相互关系的模式生物系统。近年来有研究表明低毒病毒的感染能对板栗疫病菌线粒体的功能产生影响,为了阐明低毒病毒感染对线粒体的
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板栗疫病菌与低毒病毒系统是研究宿主与病毒相互关系的模式生物系统。近年来有研究表明低毒病毒的感染能对板栗疫病菌线粒体的功能产生影响,为了阐明低毒病毒感染对线粒体的影响,我们对板栗疫病菌菌株EP155和EP713的线粒体进行了差异蛋白质组学研究。对板栗疫病菌线粒体提取纯化方案做了优化:采用液氮研磨破碎真菌菌丝细胞,差速离心和蔗糖密度梯度相结合分离并纯化得到线粒体,并使用western blot验证线粒体富集率。线粒体蛋白双向电泳条件被确定:200μg蛋白装载于24 cm、pH 3～10、非线性胶条进行等电聚焦,SDS-PAGE后使用银染染色,获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的线粒体蛋白质双向电泳图谱。随机选择10个蛋白质点进行质谱分析,9个获得有效注释,蛋白质检出率为90%,获得注释的蛋白质点均为线粒体特异性蛋白质证明了所提线粒体的具有很高的纯度。使用2D-DIGE技术对EP155和EP713线粒体蛋白样品进行分离,使用DeCyder 2D 7.0软件对所得图谱进行差异分析,共获得了 41个有效差异点(Av.Ratio>1.5,ANOVA<0.05),质谱鉴定并注释为30种蛋白质。其中EP713中上调的蛋白16个,下调的蛋白14个。这些差异蛋白质按其功能分类与三羧酸循环和氧化磷酸化、ROS水平、脯氨酸与谷氨酸代谢、运输与转运以及缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸分解代谢等途径密切相关。本实验全面系统的绘制了板栗疫病菌菌株EP155与EP713线粒体差异蛋白质图谱,为阐明线粒体低毒力现象机理进行了有益探索。
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