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目的:对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)过量会导致急性肝损伤(Acute liver injury,ALI),急性肝衰竭(Acute liver failure,ALF)甚至死亡。目前,临床常用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)来治疗APAP所致的肝毒性,但不良反应使其应用受限,有必要研发新的防治靶点和药物。在前期研究中,我们已证实烟酰胺(Nicotinamide,NAM)可以减轻APAP诱导的急性肝损伤,但具体机制尚不清楚。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD),能以NAM为前体合成,有氧化型(NAD~+)和还原型(NADH)两种状态,参与了多种重要的细胞生命过程。此外,NAD~+还可作为酶的底物,调控其活性。近年来,疾病状态下的NAD~+水平变化引起了越来越多的关注。因此,NAD~+可能成为拮抗APAP诱导的急性肝损伤的潜在靶标,其前体NAM可能通过影响肝脏NAD~+水平发挥保护作用。方法:在雄性Balb/c小鼠腹腔注射不同浓度(100 mg/kg,300 mg/kg,500 mg/kg)APAP,建立急性肝损伤模型。采用分光光度法检测肝脏NAD~+水平,蛋白免疫印迹检测NAD~+合成和消耗中两个重要蛋白-烟酰胺磷酸核糖基转移酶(Nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)和聚(ADP-核糖)聚合酶1(Poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)的表达变化,以探究NAD~+在急性肝损伤中的作用。在此基础上,NAM预处理荷APAP小鼠,观察其对肝脏NAD~+水平和NAMPT、PARP-1蛋白表达的影响。同时,为了阐明NAM是否通过激活抗氧化途径发挥保护效应,首先通过赖氏法检测血清ALT、AST水平,测算肝指数,肝脏大体标本和肝组织切片HE染色观察形态变化来确定保护作用。免疫印迹检测抗氧化信号通路重要分子-核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)的表达变化,并检测氧化应激相应的指标:丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH)。结果:(1)不同浓度APAP诱导的急性肝损伤模型中,随着APAP浓度增加,肝组织NAD~+水平呈剂量依赖性降低。同时,NAMPT和PARP-1的蛋白表达分别下调和上调。(2)NAM预处理可以改善APAP引起的NAD~+水平降低,促进NAMPT和抑制PARP-1的蛋白表达。(3)NAM预处理明显减轻了APAP诱导的急性肝损伤:血清ALT、AST水平降低,肝脏指数下降,肝脏大体标本和肝组织切片HE染色镜下观察显示形态学异常得以改善。(4)APAP可引起Nrf2表达下调,而Keap1则相反。NAM预处理则能改善Nrf2的表达下降和抑制Keap1的表达,并且触发Nrf2从细胞质转位到细胞核。与此一致,APAP可引起了MDA和MPO升高,SOD和GSH降低;NAM则改善上述的SOD、GSH降低和减轻MDA、MPO升高。结论:本研究结果表明APAP可降低肝脏NAD~+水平,主要是通过下调NAMPT和上调PARP-1的表达,从而减少NAD~+的合成,增加其消耗。NAM则可促进NAMPT和抑制PARP-1的表达,从而改善肝脏NAD~+水平,进而可能通过激活Nrf2信号通路,增强抗氧化能力,减轻APAP诱导的急性肝损伤。