目的：在大肠杆菌原核原核体系中表达人溶菌酶基因，并对蛋白进行纯化、鉴定及活性检测。为工业化放大生产人溶菌酶提供实验基础。方法：通过RT-PCR技术从人前列腺癌细胞中提取人溶菌酶基因序列，将此基因序列克隆至带有His标签的原核表达载体Pet-15b上，用pET-15b–hlysozyme的连接产物转化感受态DH5α提取质粒，转化工程菌gami，工程菌用IPTG诱导蛋白表达，用SDS-PAGE凝胶电泳检测目的蛋白表达情况。蛋白表达条件优化后，进行工艺放大表达，产物经超声破碎，包涵体体外折叠复性后经凝胶电泳检测，用Western blot,MALDI-TOF质谱法鉴定目的蛋白性质，用热激法鉴定其生物活性，同时检查其对大肠杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制作用。结果：经过PCR、琼脂糖电泳鉴定和核苷酸序列测定，证明重组表达pET-15b-hLysozyme构建成功。经SDS-PAGE凝胶电泳检测结果显示，在相对分子量约为17kDa的地方有明显的目的条带, Western blot,MALDI-TOF质谱法鉴定结果显示人溶菌酶蛋白得到了表达。25℃下，终浓度0.3mmol/L的IPTG诱导6h，蛋白表达量最高，目的蛋白占总菌体蛋白的49.6%。包涵体经洗涤纯化、体外折叠复性后，蛋白具有良好的酶活性和抑菌活性，且纯度超过95%，浓度为30μg/ml重组人溶菌酶蛋白对大肠杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制率分别为47.59%、58.02%、35.43%，高于同浓度的市售溶菌酶样品。结论：本实验在大肠杆菌体系中成功表达了人溶菌酶基因蛋白，表达量高，而且包涵体经体外折叠复性活性好。