论文部分内容阅读
日本流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）简称乙脑，是由乙脑病毒（Japaneseencephalitis virus，JEV）感染人类及家畜引起的一种主要损害中枢神经系统的人兽共患传染病。该病主要流行于夏秋两季，蚊子是其主要传播媒介，而猪为重要的贮存和增殖宿主。不同年龄、品种的猪均易感，JEV对猪的致死率不高，但感染后可导致种猪繁殖障碍、仔猪和育肥猪出现神经症状，怀孕猪可出现流产、产死胎、木乃伊胎等，给养猪业造成严重的经济损失。为了解河南省规模化养殖场猪群乙脑病毒流行株的特征，本研究对临床乙脑疑似病例的流产胎儿脑脊液进行病毒盲传分离，经RT-PCR鉴定、基因克隆鉴定、间接免疫荧光实验及乳鼠感染试验，成功分离鉴定了1株JEV毒株，命名为CSF.XZ-2D。基于JEV E基因和M基因的系统发生树分析表明该分离株属于基因Ⅲ型。随后对CSF.XZ-2D在BHK-21细胞上进行了连续传代培养，并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明，经连续传代25次后病毒E基因趋于稳定，氨基酸位点E271（E→V）和E278（V→L）传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高，经连续传代后均未发生突变，与SA14-14-2相应位点完全一致。但是，另外一些位点的遗传稳定性较差，如E279和E312分别出现K→M→K和K→R→K→R的反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。本研究初步揭示了JEV分离株CSF.XZ-2D的基因型及部分基因特征，并对其细胞适应过程中的E基因稳定性进行了初步研究，这有助于进一步深入了解河南省规模化猪场JEV流行毒株的特征，并为进一步研究其基因遗传稳定性提供了重要基础。