关于华法林和维生素D3联合应用建立大鼠心血管钙化模型的实验研究

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目的:  心血管钙化是一种因矿物质代谢失调而导致的,能够引起急性心血管事件明显增加,甚至发生死亡的疾病。它主要累及动脉和心脏瓣膜,尤其是主动脉瓣。目前,对于心血管钙化的分子机制尚未明确,而且临床上仍然缺乏有效的心血管钙化的防治措施。因此,建立适当的心血管钙化的动物模型对其发病机制的探讨具有重要意义。本研究通过比较不同时间华法林和维生素D3的联合应用对大鼠腹主动脉及心脏瓣膜钙化发生率及程度的影响,探求建立心血管钙化动物模型的快速、有效方法。  方法:  4周龄SD雄性大鼠随机分为空白对照组(n=4)、造模7天组(n=6)、造模11天组(n=7)和造模14天组(n=7),各模型组给予华法林(15mg/100g/12小时)和维生素D3(3万单位/100g/天)皮下注射,同时辅以维生素K1(1.5mg/100g/天),分别持续给药7天、11天及14天,空白对照组不给药。取各组动物腹主动脉和心脏瓣膜进行病理切片,用Von Kossa染色法显示组织钙化发生情况。用Image Pro Plus图像分析软件进行腹主动脉及心脏瓣膜钙化面积百分比的分析。  结果:  1.Von Kossa染色结果显示:空白对照组与造模7天组大鼠的腹主动脉及瓣膜组织结构清晰,未见明显棕黑色颗粒;造模11天组部分大鼠和造模14天组大鼠腹主动脉中膜可见局灶或成片棕黑色深染区域,弹力层断裂,瓣膜基底部及瓣叶也可见明显棕黑色颗粒沉积。  2.经华法林和维生素D3诱导后,随造模时间延长,腹主动脉及心脏瓣膜钙化发生率明显增加,其中造模7天组、造模11天组及造模14天组腹主动脉钙化发生率分别为16.7%、85.7%、100%;瓣膜钙化发生率分别为0、57.1%、66.7%;空白对照组未见明显钙化发生。  3.钙化面积百分比结果显示:空白对照组腹主动脉及心脏瓣膜均无可见钙化;造模7天组除1只动物腹主动脉出现9.96%面积的钙化以外,其余动物腹主动脉及心脏瓣膜均无明显钙化;造模11天和14天相比,随造模时间延长,心脏瓣膜钙化发生面积显著增加((9.2±3.2)%vs.(19.8±6.7)%,p<0.05),而腹主动脉钙化面积虽有增长趋势,但无显著性差异((14.8±4.9)%vs.(25.5±11.9)%,p=0.068)。  结论:  华法林和维生素D3的联合应用成功复制出大鼠典型的血管及心脏瓣膜钙化,其中,造模14天组腹主动脉及心脏瓣膜均出现高发生率的明显钙化,故这一模型不仅适用于血管钙化,亦适合应用于瓣膜钙化的研究。
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