经后增殖方对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞Fas通路的影响

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目的:(1)检测Fas凋亡通路上关键凋亡因子Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3表达水平,研究中药经后增殖方对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响;(2)探讨中药改善卵母细胞质量的可能作用机制。方法:(1)选取6-8周龄(体重180-220g)的SPF级SD雌性大鼠30只,随机分为三组:阳性组、中药组、空白组,每组各10只。其中,阳性组和中药组建立超排卵模型,于动情周期的第三天给予腹腔注射醋酸曲普瑞林注射液,连续9天,1次/天;第9天同时腹腔注射孕马血清促性腺激素注射液,48小时后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素注射液,空白组以等体积生理盐水腹腔注射,1次/天;各组大鼠于最后一次腹腔注射2小时后处死,取卵巢组织。其中中药组每日给予中药经后增殖方灌胃处理,同时阳性组与空白组以等体积生理盐水灌胃处理,1次/天,连续11天;(2)用实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR)检测三组大鼠卵巢组织中Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3 mRNA转录水平;(3)用蛋白质印迹法(Western Blot)检测三组大鼠卵巢组织中Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3蛋白表达水平;(4)采用SPSS 19.0统计数据软件进行统计学分析。多组间比较用单因素方差分析,组间的多重比较采用LSD分析。P<0.05为差异具有统计学意义。结果:(1)QPCR法检测结果表明阳性组即控制性超排卵组大鼠卵巢组织中关键凋亡因子Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3 mRNA的转录水平较空白组和中药组明显增高,其中,空白组与阳性组具有显著差异(分别为p=0.000,p=0.000,p=0.000,p=0.002)。中药组Fas,Fasl,Caspase8 mRNA表达水平与阳性组相比差异具有显著性(分别为p=0.000,p=0.008,p=0.000),但Caspase3 mRNA表达水平与阳性组相比无统计学意义(p=0.078)。中药组大鼠卵巢组织中Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3 mRNA转录水平与空白组间无统计学差异(p>0.05);(2)Western Blot检测结果表明阳性组大鼠经超促排卵干预后卵巢组织中凋亡因子Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3蛋白表达水平较空白组和中药组明显增高,其中空白组与阳性组相比差异具有显著性(分别为p=0.004,p=0.003,p=0.001,p=0.008)。中药组Caspase3蛋白表达水平较阳性组下降,但无统计学差异(p=0.110),中药组Fas,Fasl,Caspase8蛋白表达水平低于阳性组,且与阳性组相比具有统计学意义(分别为p=0.046,p=0.048,p=0.042)。中药组大鼠卵巢组织中Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3蛋白表达水平高于空白组,但差异无统计学意义(p>0.05)。结论:(1)中药经后增殖方可下调超排卵大鼠卵巢组织Fas凋亡通路上各因子的表达水平,Fas凋亡通路上关键凋亡因子Fas,Fasl,Caspase8,Caspase3表达水平均下降;(2)中药经后增殖方可抑制卵巢颗粒细胞凋亡,改善超排卵状态下卵母细胞质量至接近自然排卵水平。因此,推测Fas通路可能是经后增殖方改善卵母细胞质量的作用机制之一。
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