论文部分内容阅读
本研究选取四种微生物菌种分别为凝结芽孢杆菌、大肠杆菌、乳酸菌、酵母菌发酵生晒参,采用紫外分光光度计测定四种菌种转化后生晒参中人参总皂苷含量。结果表明,常规方法提取测得的人参总皂苷含量为3.96±0.41%,发酵后的生晒参中人参总皂苷含量在3.24%~5.21%之间,凝结芽孢杆菌转化后人参总皂苷含量升高约31%,含量升高最明显。其次,本文通过高效液相(HPLC)法分析四种菌种发酵后生晒参和人参茎叶总皂苷中9种主要人参皂苷的含量变化,色谱条件为Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈:水按照程序进行梯度洗脱,检测波长203nm,流速1.0mL/min,进样体积为10μL。结果表明,发酵后的生晒参和人参茎叶总皂苷中主要人参皂苷含量呈现一定的变化,大肠杆菌、乳酸菌、酵母菌发酵后各个单体皂苷含量变化不明显,但凝结芽孢杆菌发酵处理后人参皂苷Rb3和Rd含量显著降低,说明经过发酵处理后有稀有皂苷产生。通过TLC、HPLC初步确定有人参皂苷CK生成。HPLC检测的色谱条件为XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈:水=45:55,柱温30℃,检测波长为203nm,流速为1mL/min。本文以人参皂苷CK的含量为指标,在单因素实验的基础上,采用正交实验设计优化凝结芽孢杆菌转化人参茎叶总皂苷生成人参皂苷CK的条件,最佳工艺条件为:培养温度为35℃,接种量1%,转速为120r/min,发酵时间是36h。本文利用经典的硅胶柱层析对发酵后的产物进行纯化,并利用高效液相色谱法HPLC、核磁共振法NMR鉴定检识,通过对比CK标准谱图,确定该化合物的结构为人参皂苷CK且纯度≥90%。文考察人参单体皂苷CK对肾脏疾病的药理活性。经腹腔注射顺铂(10mg/kg)建立急性肾损伤模型,实验小鼠分为正常组、模型组、人参皂苷CK低剂量组(20mg/kg)、人参皂苷CK高剂量组(40mg/kg),人参皂苷CK连续给药10d,每天测量小鼠体重及日常饮食饮水量,实验结束时眼眶取血测定血清中BUN、Scr含量,并取肾脏组织称重计算肾脏指数。同时测定肾脏组织中SOD、GSH、MDA活性。结果表明人参皂苷CK 20、40mg/kg给药组均可改善小鼠肾脏组织形态,抑制肾脏组织SOD和GSH活性下降,降低肾脏组织中MDA含量,同时降低血清中BUN、Scr水平。说明人参皂苷CK对顺铂所致小鼠急性肾损伤有一定的保护作用。且20mg/kg和40mg/kg剂量组表现出显著差异,其中20mg/kg剂量组的效果较优。