高雄山虫草的生物学特性及驯化优化栽培研究

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虫草是一大类具有重要食用、药用和保健功能的真菌资源,它们在医药、食品工业、农业和现代生物技术等多种领域中具有重要的应用价值。由于野生虫草资源稀少,市场需求量大,加之近年来城镇化、工业化进度的加快,虫草生长的自然环境的退化和破坏,虫草资源被滥采滥挖,野生虫草的产量逐年降低,远不能满足市场的需求。因此,急需对虫草进行人工驯化和栽培,对其相关栽培生产技术进行研究和探索,提高虫草的产量和品质,或开发出可人工栽培的虫草新资源或新品种。目前市场上除了常见可栽培的蛹虫草Cordyceps militaris、蝉花虫草Isaria cicadae和广东虫草Tolypocladium guangdongense以及少数几种虫草外,高雄山虫草Cordyceps tenuipes作为一种经济价值较高的珍稀野生虫草种类,前人也有部分人工栽培研究,但因产量不高等原因,目前市场上尚未有其栽培的商业产品。高雄山虫草中富含多种有效活性成分,对人体中各类疾病具有很好的治疗效果是冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis的优良替代品。目前由于高雄山虫草菌丝体生物学特性研究不全面,人工栽培技术尚不成熟,产量与生物学效率低,制约了其进一步发展。本研究对采集自黄山的一种野生虫草进行了一系列的研究。首先对其形态特征和分子生物学进行了鉴定,综合其形态特征和分子序列确定其为高雄山虫草;其次对高雄山虫草菌丝体的生物学特性进行了全面的研究,通过单因素试验和正交试验筛选了菌丝固体平板和液体摇瓶中的最适生长温度、p H、碳源、氮源等生长因子;同时对高雄山虫草的生长周期进行初步探索,筛选了不同培养料对其菌丝、原基和孢梗束生长及产量的影响;进一步研究了添加蚕蛹粉及添加量对高雄山虫草不同生长阶段及产量的影响,对规模化栽培或商业化应用具有一定的参考价值。主要详细研究内容如下:1.野生虫草形态和分子鉴定。除形态特征符合高雄山虫草形态特征外,该虫草所测ITS序列与Gen Bank中序列号为MH857959的虫草其序列相似度高达99.64%,同时构建系统发育树,从遗传进化角度分析它与其它虫草的遗传距离,鉴定其为一株野生高雄山虫草Cordyceps tenuipes。2.高雄山虫草菌丝体生物学特性研究。对高雄山虫草菌丝体利用PDA和PDB培养基进行了生长曲线等研究,PDA培养基中菌丝不同时间的生长速度相差不大,27d左右菌丝长满整个培养基(90mm);PDB培养基中菌丝在第6d时最佳;液体摇瓶的接种量为10%时效果最佳;通过单因素试验,初步筛选出了高雄山虫草菌丝在固体和液体条件下生长的最适温度、p H、碳源和氮源,发现该虫草菌丝在固体和液体条件下的最适生长因子一致,即最适温度为25℃,最适p H为7,最适碳源为蔗糖,最适氮源为酵母粉;通过三水平三因素正交试验对筛选出的最佳生长因子和培养基配方进行了精准验证,发现其最佳培养基配方为A2B3C3,即蔗糖30g/L、酵母粉15g/L、磷酸二氢钾2g/L和七水硫酸镁2g/L,菌丝生长速度为0.223cm/d,菌丝球干重为27.104 g/L,均高于各试验组数据。3.高雄山虫草栽培基质及生长周期研究。栽培基质及生长周期研究分为菌丝阶段、原基阶段和孢梗束阶段,菌丝生长阶段需要7d左右时间,光照3d左右菌丝就可完成转色,原基诱导需要4d时间,从接种到采收,高雄山虫草整个生长周期在40d左右;初步对高雄山虫草人工栽培培养基进行筛选,大米和小麦是比较适合的栽培培养基,而玉米芯则不适合高雄山虫草的栽培;通过筛选不同栽培料对高雄山虫草菌丝、原基及孢梗束生长的影响,其中以添加蚕蛹粉的小麦培养料孢梗束产量最佳,每瓶平均产量13.564g,平均生物学效率(67.820±6.018)%;进一步研究了小麦培养基中蚕蛹粉的添加量对高雄山虫草孢梗束的生长影响,蚕蛹粉的添加量在1.5~3.0g/瓶之间孢梗束总体生长状况较好,产量较高,添加量为3.0g/瓶时,产量达到最大值18.523g,生物学效率为(92.613±6.524)%,同时发现,蚕蛹粉的添加量过大(大于4.5g/瓶)会导致菌丝不能渗透培养基,后期易造成污染,降低高雄山虫草的质量与产量。
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