论文部分内容阅读
背景:肥胖已成为一个全球性公共卫生问题,肥胖增加多种疾病的发病率包括心血管疾病、2型糖尿病、高血压、癌症等。肥胖是一种常见的慢性代谢疾病,主要表现在脂肪细胞的增大或者脂肪细胞增多的病理表现。间充质干细胞和脂肪前体细胞的分化是形成脂肪细胞的基础。近年研究表明,生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)与代谢相关的心血管病和糖尿病关系密切。而GDF-15是否调控脂肪细胞的分化,目前尚不清楚。目的:本研究的主要目的:1.通过表达谱分析检测高血压大鼠和正常大鼠的脂肪组织中的表达差异;2.研究GDF-15对于间充质干细胞成脂分化的影响,并探索其调控成脂分化的机制,作为临床干预肥胖的潜在价值。方法:1.提取原代人腹膜后脂肪和大鼠腹膜后脂肪来源的间充质干细胞,并使用经典的“鸡尾酒”方案:胰岛素、地塞米松、罗格列酮、1-甲基-3-3异丁基黄嘌呤(IBMX)诱导各类间充质干细胞分化为成熟脂肪细胞;2.体外采用GDF-15抑制剂异烟肼处理间充质干细胞,油红O染色观察脂肪分化后脂滴形成情况,定量检测成熟细胞中甘油三酯和胆固醇含量;3.检测参与脂肪细胞分化标志物(ACC、fas、fabp4、AP)和关键转录因子(PPARγ、C/EBPα、)的蛋白表达水平。4.体外使用PPARγ激动剂和(或)GDF-15抑制剂处理间充质干细胞,油红O染色观察脂肪分化后脂滴形成情况,并检测参与脂肪细胞分化标志物和关键转录因子基因的蛋白表达水平。结果:1腹膜后脂肪组织表达谱分析结果表明,GDF-15在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)脂肪中的表达量为WKY(wistar-Kyoto)大鼠的4倍以上;2.异烟肼(Isoniazid,INH)可以明显抑制间充质干细胞中的GDF-15表达;3抑制GDF-15显著减少了间充质干细胞的脂肪分化,具体表现为光镜和油红O染色直接观察到脂滴形成减少,ACC、fas、fabp4、AP等脂肪分化的标志物显著下降,且明显减少甘油三酯、总胆固醇合成;4.抑制GDF-15后显著降低了脂肪分化的关键转录因子PPARγ、C/EBPα蛋白水平的表达,而使用PPARγ激动剂激活PPARγ-C/EBPα通路后,恢复了GDF-15对间充质干细胞脂肪分化的调控作用,具体表现为光镜和油红O染色观察发现脂滴形成恢复,脂肪分化的标志物表达上调。结论:1.GDF-15在高血压大鼠腹膜后脂肪组织中高表达,在正常大鼠腹膜后脂肪中低表达。2.外源性抑制GDF-15表达通过影响PPARγ-C/EBPα通路抑制脂肪来源的间充质干细胞分化成脂肪细胞。