甜瓜乙烯应答因子基因CmERFi-5、CmERFI-13、CmERFI-15在果实发育过程中的功能分析

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tianzhiyou258
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本文以甜瓜品种河套蜜瓜为材料,研究了甜瓜乙烯应答因子(Ethylene response factor, ERF)基因CmERFI-5、CmERFI-13、CmERFI-15在果实中的功能。ERF基因位于乙烯信号转导途径的下游,通过结合GCC-box调控下游靶基因的表达,从而起到调控果实发育的功能。采用RT-PCR技术从甜瓜中克隆到了CmERFI-5、CmERFI-13和CmERFI-15基因的cDNA。所克隆的全长cDNA分别为934 bp、879 bp和769 bp,其ORF分别为732 bp、834 bp、636 bp,编码243、277、211个氨基酸。分别构建其超表达载体和RNAi载体,通过农杆菌介导的瞬时表达技术将目的基因的超表达及RNAi载体注射到绿熟期甜瓜果实中,并对注射部位进行观察。CmERFI-5基因的超表达和RNAi干扰载体使注射部位均出现了保持绿色(延迟成熟)的表型。CmERFI-13基因的超表达载体注射部位提前变黄,而RNAi干扰质粒使注射部位保持绿色。CmERFI-15基因的超表1达载体注射部位保持绿色,而RNAi载体注射部位提前变黄。分子检测结果显示,注射CmERFI-5、CmERFI-13和CmERFI-15基因的超表达载体后,注射部位与对照相比目的基因的表达量上升,表明外源基因得到了表达;注射RNAi载体后,目的基因的表达量与对照相比下降,表明成功抑制了内源基因的表达。果实成熟相关基因的qRT-PCR检测表明,CmERFI-5基因没有显示出调控作用,CmERFI-13基因对CmACO1、CmACS1、CmADH2和CmCCD1基因有正调控作用。CmERFI-15基因对CmACO1、CmACS1基因有负调控的作用。综上所述,在果实成熟过程中CmERFI-5基因没有功能,CmERFI-13基因具有促进果实成熟的功能,而CmERFI-15具有延缓果实成熟的功能。
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