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目的采用体外细胞培养的方法,建立SiO2诱导的NR8383细胞染尘模型,探讨miRNA-101（miR-101）对SiO2诱导NR8383自噬水平的影响。方法1模型制备及分组:（1）体内实验:雄性SD大鼠40只,适应性饲养一周后随机分为对照组和模型组,每组各20只。对照组:每只大鼠气管内灌注1.0ml灭菌NaCl溶液,左右气管各0.5ml;模型组:对每只大鼠气管内灌注1.0ml灭菌NaCl溶液与SiO2粉尘混悬液（50mg/ml）,左右支气管各0.5ml。两组分别于造模后3d、7d、14d、28d分批处死留取肺组织。（2）体外实验:生长状态良好的NR8383细胞消化后计数接种于96孔板,分为4组。对照组:NR8383完全培养;SiO2刺激组:NR8383+SiO2（0.05mg/ml）;miR-101干预组:NR8383+LV-rno-mir-101α+SiO2（0.05mg/ml）,培养12h后更换常规培养基,72h观察感染效率。加入SiO2混悬液,终浓度为50mg/l;阴性对照组:NR8383+CON137+SiO2（0.05mg/ml）,其他操作同miR-101干预组。于37℃、5%CO2饱和湿度的孵箱中培养,分别于染尘成功后6h、12h、24h、48h留取细胞。2检测指标及方法:（1）HE染色观察NR8383细胞形态学改变;（2）Real time-PCR检测大鼠矽肺模型肺组织和体外染尘的NR8383细胞中miR-101的表达水平。Real time-PCR检测转染病毒后各组细胞中miR-101的表达水平;（3）CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;（4）免疫细胞化学染色法检测各组细胞中LC-3、Beclin-1及Atg4D的分布及表达;（5）Western-blot法检测各组细胞中LC-3、Beclin-1、Atg4D的表达。3统计学分析:应用Rotor-Gene 6.0.14软件,采用相对定量法Comparative Delta-delta Ct分析Real time-PCR结果;CCK-8法使用酶标仪测定各组OD值;使用image医学图像分析软件对免疫细胞化学结果进行半定量检测,用IOD值表示;应用image lab医学图像分析软件对蛋白印迹所表达的条带进行半定量检测,用平均光密度值表示。所得到的实验数据,建立EXCEL数据库,采用SPSS 22.0统计学软件进行分析,计量资料数据以均数±标准差（`x±s）表示,采用单因素方差分析检验,两组间对比用q检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1 Real time-PCR结果:体内实验中,与对照组相比,大鼠肺组织中miR-101的表达在SiO2刺激后3d、7d、14d、28d逐渐降低,于28d降到最低（P<0.05）;体外染尘的NR8383细胞中miR-101的表达随着培养时间的延长逐渐降低,在48h下降到最低（P<0.05）;体外实验中,转染病毒后SiO2刺激组miR-101逐渐降低,miR-101干预组中miR-101的表达随着时间延长逐渐升高,对照组和阴性对照组各时间点无明显变化。2 HE染色结果:对照组NR8383细胞呈卵圆形或扁圆形,胞核居中或偏位,胞质颜色均匀,见不到SiO2吞噬颗粒;SiO2刺激组的细胞体积相对于对照组明显增大,形状为圆形或不规则形,胞核多位于一侧,能够见到点片状的细胞碎片。3 CCK-8细胞增殖检测结果:随着培养时间的增加,对照组NR8383细胞增殖明显增多,接种后第16h内细胞开始增殖,且增殖速度较快,第48h72h增殖速度减缓,进入平台期;SiO2刺激组、miR-101干预组和阴性对照组细胞也出现增殖,趋势与对照组相同,24h达到高峰,48h后增长减缓,但整体水平低于对照组（P<0.05）;SiO2刺激组、miR-101干预组和阴性对照组各时间点细胞增殖情况无明显差异（P>0.05）。4免疫细胞化学染色检测结果:LC-3、Beclin-1和Atg4D蛋白均为胞质表达,细胞胞质出现棕黄色颗粒为阳性表达。对照组仅有微弱表达;SiO2刺激组胞浆呈棕红色或棕黄色,免疫反应较强,其表达在6h开始升高,于24h达到高峰48h后又出现回落,但仍比对照组基础水平高;miR-101干预组与SiO2刺激组相比,各时间点三个蛋白的表达有所降低（P<0.05）,表达趋势没有变化;阴性对照组与SiO2刺激组相比,各时间点三个蛋白的表达并没有显著变化（P>0.05）,高于对照组（P<0.05）,低于miR-101刺激组（P<0.05）。5 Western blot检测结果:对照组LC-3、Beclin-1和Atg4D蛋白有少量的基础表达,各个时间点之间没有明显差异;相较于对照组,SiO2刺激组四个时间点LC-3、Beclin-1和Atg4D的表达明显升高（P<0.05）,6h开始升高,24h达到高峰,48h出现回落,但仍比对照组基础水平高;miR-101干预组与SiO2刺激组相比,各个时间点LC-3的表达有所降低（P<0.05）,表达趋势没有变化;阴性对照组与SiO2刺激组相比,LC-3的表达并没有显著变化,高于对照组（P<0.05）,低于miR-101刺激组（P<0.05）。结论miR-101参与了矽肺纤维化的发生发展,过表达miR-101后能够抑制SiO2诱导的NR8383细胞自噬的发生,一定程度上延缓矽肺的发展,可能是通过负向调控Atg4D的表达来实现的。图22幅;表9个;参111篇。