表皮生长因子(EpidermalGrowthFactor，EGF)是生长因子家族的重要成员之一，EGF通过与表皮生长因子受体(EpidermalGrowthFactorReceptor,EGFR)结合后启动其下游的信号传导通路而发挥一系列生理及病理作用。EGF可以强烈地刺激细胞分裂，与胚胎的发生与生长、组织的修复与再生以及肿瘤的发生有密切关系。EGFR是一种膜受体糖蛋白，由膜外结合区域、跨膜转换区域和胞质效应区域三部分组成。EGFR广泛分布于大多数正常细胞中，包括肝细胞、胃肠粘膜上皮细胞、成纤维细胞等。在肺癌、乳腺癌等多种人类肿瘤细胞中可以检测到EGFR的异常高表达，近年来的一些研究发现EGF、EGFR在肝癌中也存在过度表达，且与肝癌的形成、发生、发展有密切关系。 分子靶向药物是治疗肝癌的一个新领域，由于对其治疗肝癌的作用及机制尚未完全明确，国内外均未应用到临床。 本论文旨在通过检测肝癌患者肿瘤组织和癌旁肝组织中EGFR及其突变体EGFRvⅢ的表达，探讨它们与肝癌患者各项临床指标及预后的关系，同时对EGFR酪氨酸激酶靶向抑制剂Iressa治疗肝癌进行临床前研究，分别了解其对肝癌的体外作用和动物体内作用以及可能产生的副作用，以探索其临床应用前景及可能的价值。 第1章.肝癌组织EGFR及突变体EGFRvⅢ的表达及其临床意义 1.1背景与目的:表皮生长因子受体(EGFR)在多种肿瘤中高表达，它通过影响细胞的信号传导，在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。EGFRvⅢ是人体内最常见的EGFR突变体之一，至今尚未在正常组织中被检出。本研究的目的是检测人体肝细胞癌肿瘤组织及癌旁肝组织中EGFR和EGFRvⅢ的表达情况并分析其临床意义。 1.2病例与方法:本研究共选取了2001年12月至2002年11月期间在中山大学肿瘤防治中心肝胆科临床诊断为原发性肝癌，行手术切除肿瘤，术后经病理确诊为肝细胞癌，并有完整随访资料的肝癌患者58例。 用免疫组化二步法分别检测58例患者肿瘤及癌旁肝组织中EGFR、EGFRvⅢ的表达情况，与患者的临床资料进行相关分析，同时对患者无瘤生存期和总生存期与各项参数进行Cox多因素回归分析和Kaplan-Meier生存分析，采用SPSS13.0forWindows统计软件进行数据处理。 1.3结果:肝癌组织EGFR、EGFRvⅢ表达的阳性率(+～+++)分别为74.1％、63.8％；癌旁肝组织EGFR、EGFRvⅢ表达的阳性率(+～+++)分别为81.0％、77.6％，癌旁肝组织中EGFR、EGFRvⅢ的表达程度较肝癌组织高。EGFR及EGFRvⅢ在肝癌组织和癌旁肝组织的表达形式也存在差异，在癌旁肝组织中多为细胞浆内颗粒状表达，而在肝癌组织中则多为细胞膜表达。EGFRvⅢ在距离肿瘤较远的正常肝细胞→癌旁肝细胞→肝癌细胞中的表达形式表现为由阴性或弱阳性表达→细胞浆内强阳性表达→转为细胞膜表达的逐渐过渡过程。 肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级(r=-0.289，P=0.028)及术前AFP值(r=-0.278，P=0.035)呈负相关。癌栓及/或卫星灶(P＜0.001)和肿瘤病理分级(P=0.023)是肝癌患者术后无瘤生存期的主要影响因素；肝癌患者术后总生存期的主要影响因素包括患者的肿瘤家族史(P=0.014)、肿瘤最大径(P＜0.001)、癌栓及/或卫星灶(P=0.039)以及肿瘤的病理分级(P=0.002)。生存分析结果显示肝癌组织EGFR及EGFRvⅢ表达阴性与表达阳性的两组患者无瘤生存率及总生存率均无明显差异。 1.4结论:肝细胞癌患者肿瘤组织及癌旁肝组织中均存在EGFR和EGFRvⅢ的高表达，EGFR以及EGFRvⅢ的过度表达可能是肝癌发生过程中的事件。肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级及术前AFP值呈负相关，肝癌组织EGFR及EGFRvⅢ的表达情况不是肝癌预后的独立影响因素。 第2章.EGFR酪氨酸酶抑制剂Iressa对人肝癌细胞系的体外作用 2.1背景与目的:在体外试验中Iressa对头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌等一系列肿瘤细胞株显示出生长抑制作用，也有学者报道Iressa在体外能抑制肝癌细胞系的生长并促进其凋亡。本研究的目的是通过体外肝癌细胞培养及药敏检测，初步探讨Iressa对治疗肝癌的可能价值。 2.2方法:以人肝癌细胞株Hep-3B、Hep-G2作为研究对象，采用MTT(四甲基偶氮唑蓝，methylthiazolyltetrazolium)法检测Iressa对这两种不同生长速度的肝癌细胞株的抑制作用。 2.3结果:Iressa能够抑制人肝癌细胞株Hep-3B、Hep-G2的增殖，并且这种作用呈剂量依赖性。Iressa抑制肝癌细胞株Hep-3B、Hep-G2增殖的IC50值分别为13.5μmol/L和9.6μmol/L。 2.4结论:Iressa在体外可以抑制人肝癌细胞系Hep-3B、Hep-G2的增殖，其抑制作用呈剂量依赖性。 第3章.Iressa对人肝癌移植瘤荷瘤裸鼠的体内作用 3.1背景与目的:Iressa是一种新型分子靶向药物，在临床治疗晚期非小细胞肺癌中显示出较好疗效，对Iressa治疗肝癌的研究国内外报道较少。本文第2章中已证实Iressa在体外可以抑制人肝癌细胞系Hep-3B及Hep-G2的增殖，本部分研究旨在观察Iressa对Hep-3B、Hep-G2肝癌移植瘤裸鼠的体内抑瘤效果及副作用，并探讨其抑瘤效果与肿瘤组织EGFR、EGFRvⅢ表达程度的关系。 3.2方法:Hep-3B、Hep-G2肝癌移植瘤裸鼠随机分为对照组、低剂量组和高剂量组，每组各8只。分别用葡萄糖溶液、Iressa100mg/kg和Iressa200mg/kg每日一次灌胃，每周5天，连用3周，用药结束后第2天处死动物。记录各组裸鼠治疗前后的体重、肿瘤大小。分别计算不同剂量的Iressa对两种不同类型肝癌的抑瘤率，比较各组裸鼠治疗后肿瘤大小、体重及脾指数。 用免疫组化二步法分别检测治疗后各组裸鼠Hep-3B、Hep-G2肿瘤组织EGFR以及EGFRvⅢ的表达情况，分析Iressa的抑瘤效果与肿瘤EGFR、EGFRvⅢ表达程度的关系，以及各治疗组与对照组裸鼠肿瘤组织表达EGFR、EGFRvⅢ的差异。 3.3结果:治疗前各组裸鼠体重和肿瘤体积均衡。Iressa治疗后Hep-3B及Hep-G2移植瘤体积及瘤重均明显低于对照组。低剂量组和高剂量组Iressa对Hep-3B肝癌移植瘤的抑瘤率分别为：32.77％、46.99％；低剂量组和高剂量组Iressa对Hep-G2肝癌移植瘤的抑瘤率分别为：68.57％、75.24％，低剂量与高剂量组抑瘤率无明显差异(F=7.656，P=0.221)。两种肿瘤类型中高剂量组裸鼠的脾指数和体重下降与对照组比较均有明显差异，低剂量组和对照组裸鼠的脾指数和体重比较无明显差异。 对照组及治疗组Hep-3B肝癌组织中EGFR及EGFRvⅢ表达均为弱阳性(+)，对照组及低剂量组Hep-G2肝癌组织中EGFR及EGFRvⅢ表达分别为强阳性(+++)及阳性(++)，高剂量组Hep-G2肝癌组织中EGFR及EGFRvⅢ表达分别为阳性(++)及弱阳性(+)，较对照组减弱(P＜0.001)。Iressa对Hep-3B、Hep-G2肝癌的抑瘤率与肿瘤组织EGFR的表达无明显相关，可能与肝癌组织EGFRvⅢ的表达有关。 3.4结论:Iressa对裸鼠Hep-3B、Hep-G2肝癌移植瘤生长有明显抑制作用。抑瘤作用与肝癌组织表达EGFR的程度无明显相关，可能与肝癌组织表达EGFRvⅢ的程度呈正相关。Iressa100mg/kg与200mg/kg剂量抑瘤率无明显差异。Iressa100mg/kg剂量对裸鼠体重和免疫器官无明显影响，200mg/kg剂量可引起裸鼠体重和免疫器官功能下降。 结论 1.肝细胞癌患者的肿瘤组织及癌旁肝组织中均存在EGFR以及EGFRvⅢ的高表达。 2.EGFR及EGFRvⅢ在肝癌组织和癌旁肝组织的表达程度和形式存在差异，在癌旁肝组织中多为细胞浆内颗粒状表达，而在肝癌组织中则多为细胞膜表达。 3.EGFRvⅢ在距离肿瘤较远的正常肝细胞→癌旁肝细胞→肝癌细胞中的表达形式呈现出由阴性或弱阳性→细胞浆内出现→转为细胞膜表达的过渡过程。 4.肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级及术前AFP值呈负相关。 5.癌栓及/或卫星灶和肿瘤的病理分级是肝癌患者术后无瘤生存期的主要影响因素。 6.肝癌患者术后总生存期的主要影响因素包括患者的肿瘤家族史、肿瘤最大径、癌栓及/或卫星灶以及肿瘤的病理分级。 7.Iressa在体外能够抑制人肝癌细胞系Hep-3B及Hep-G2的增殖。 8.100mg/kg和200mg/kg剂量的Iressa对裸鼠Hep-3B、Hep-G2肝癌移植瘤生长均有明显抑制作用。 9.Iressa的抑瘤作用与肝癌组织表达EGFR的程度无关，可能与肝癌组织表达EGFRvⅢ的程度有关。 10.Iressa100mg/kg剂量对裸鼠体重和免疫器官无明显影响，200mg/kg剂量可引起裸鼠体重和免疫器官功能下降。